Перенос малярии

Если Вы - умный или дурак, патриот или космополит, террорист или борец с терроризмом,

глобалист или антиглобалист, экстремист или борец с экстремизмом, педофил или педофоб, русофил или русофоб, гомофил или гомофоб, верующий или атеист, коммунист или антикоммунист, феминист или антифеминист, фашист или антифашист, защитник прав детей или защитник прав родителей,

покоритель природы или её защитник, правозащитник или правонарушитель, наркоман или борец с наркотиками,

а для людей, у которых нет априорных установок.

[Здесь отредактированный текст. Смысл не изменился, а читать и использовать будет, надеюсь, удобнее. СР. 01.03.2021.]

(Объяснение: *.html не принимает знак "от  до". Пришлось заменить его на "-".)

Во всех статях (и в тексте, и в таблицах) принят ряд условных обозначений. Чтобы не повторяться я привожу их здесь:

ОО - обилие ооцист - среднее число ооцист у всех комаров данной группы.

ОЗ - среднее число ооцист у зараженных комаров данной группы.

ОИ - ооцистный индекс - доля (%) комаров, имеющих ооцисты плазмодия.

СИ - спорозоитный индекс - доля (%) комаров, имеющих спороцисты плазмодия.

ВВ - выживаемость возбудителя (ооцистно спорозоитный индекс) - СИ/ОИ в %.

M±m - Среднее значение и ошибка репрезентативности для р=0.05.

Связь между количеством крови, которое выпивают комары, и их заражаемостью возбудителем малярии.

Сравнение заражаемости комаров возбудителями малярии при кровососании на человеке и через мембрану.

Обзор данных по восприимчивости комаров фауны СССР к завезенным штаммам малярийных паразитов.

Сохранение возбудителя малярии в комарах, получивших сублетальные дозы инсектицида.

Отсутствие влияния повторного кровососания комаров на их зараженность возбудителем малярии.

Плодовитость комаров Aedes aegypti в связи с их зараженностью возбудителем малярии Plasmodium gallinaceum.

Чувствительность к ДДТ комаров Aedes aegypti, зараженных возбудителем малярии.

Влияние контакта комаров с ДДТ на их восприимчивость к возбудителю малярии.

Всегда ли необходимы сахара для заражения комаров плазмодиями малярии.

Влияние условий развития комаров Aedes aegypti L. на их заражаемость Plasmodium gallinaceum Brumpt.

Новые модели циркуляции возбудителя малярии Plasmodium gallinaceum с использованием малярийных комаров фауны СССР.

Особенности восприимчивости Aedes togoi к Plasmodium gallinaceum.

Влияние состояния репродуктивной системы самок комаров на их заражаемость возбудителем малярии.

Связь между количеством крови, которое выпивают комары, и их заражаемостью возбудителем малярии.

Одним из важнейших этапов эпидемического процесса при малярии является заражение переносчиков. Раскрытие механизмов, определяющих количественные и качественные характеристики этого этапа - необходимый шаг в процессе поиска средств и методов перерыва передачи и тем самым борьбы с заболеваемостью.

Общие соображения заставляют предполагать, что одним из факторов, определяющих заражаемость комара, является количество выпитой крови: чем больше крови, тем (при прочих равных условиях) больше гаметоцитов, тем выше уровень зараженности переносчика. И так до тех пор, пока не будет превышена "оптимальная доза", которая, по мнению Алексеева (1985), существует для любой пары возбудитель - переносчик. Кроме того, увеличение количества выпитой крови усиливает растяжение средней кишки, что едва ли безразлично для прохождения оокинет через ее стенки.

Несмотря на то, что ответ на вопрос о влиянии количества принятой комаром крови на его зараженность представляет интерес и для эпидемиологов, и для экспериментаторов, он исследован еще недостаточно полно. Задача предлагаемой работы - оценить влияние количества выпитой крови и степени насыщения комаров на их заражаемость.

Материалы и методы

Работа выполнена на лабораторной модели малярии: P. gallinaceum (возбудитель), Ae. aegypti (переносчик), цыплята (позвоночный хозяин). Комаров заражали на цыплятах с уровнем паразитемии 2-3 балла по шкале Немировской (1941).

Изменение количества выпитой комарами крови достигалось двумя способами: 1) специально выращивали крупных и мелких особей, которые соответственно выпивали разное количество крови; 2) при кормлении одной группы комаров части особей не давали возможность выпить полную порцию крови. Количество выпитой крови определяли путем взвешивания комаров до и сразу же после кровососания. В одной серии опытов (она специально оговорена в тексте) комаров, получивших неполную порцию крови, докармливали на здоровом доноре до насыщения. Эта операция проводилась практически тотчас же после кормления на зараженном доноре.

В каждом опыте сравниваемые группы комаров имели один и тот же возраст (от опыта к опыту возраст варьировал в пределах 2-4 суток). Сравниваемые группы кормили кровью одного и того же донора одновременно, что обеспечивало максимальную идентичность получаемой ими крови (и вместе с ней возбудителя). И до и после заражающего кормления комаров держали в одном и том же термостате при 28 ± 0.5 и влажности около 90 %. В период спорогонии комары имели возможность пить 10 %-ный раствор глюкозы, но крови не получали, так как известно, что возбудитель способен успешно развиваться в переносчике без повторного кровососания (Расницын, Жарова, 1984). Анализ зараженности комаров проводили дважды: на 4-ые и 10-ые сутки после заражающего кормления. В первый раз определялся ооцистный индекс (доля комаров, имеющих ооцисты) и обилие ооцист (среднее число ооцист на одного комара), второй раз - спорозоитный индекс (доля комаров, имеющих спорозоиты). По соотношению ооцистного и спорозоитного индексов вычислялось сохранение возбудителя в переносчике. Статистическая обработка проведена методами, принятыми в биометрии (Плохинский, 1961). Объем исследованного материала представлен вместе с результатами.

1. Заражаемость комаров разных размеров. В табл. 1 приведены данные, характеризующие размеры крупных и мелких комаров и количество крови, которое они выпивают. Из неё видно, что вес крови пропорционален весу комаров (R=0.9 ± 0.1) и составляет в среднем 91 % от веса голодных особей. Поскольку велики различия в весе сравниваемых групп комаров (в среднем в 1.8 раза), соответственно велики и различия в количестве выпитой ими крови (в среднем в 2.0 раза).

Несмотря на разницу в количестве выпитой крови, различия в зараженности крупных и мелких комаров не выявились (табл.1). Из 6 опытов доля зараженных среди крупных особей была выше, чем среди мелких лишь в половине случаев, да и то не более чем на 12 % . Аналогично, и уровень заражения, измеряемый числом ооцист, был практически одинаковым. Лишь в половине опытов число ооцист у крупных комаров было выше, чем у мелких. По всем опытам среднее число ооцист у крупных особей (40) почти в точности равно среднему числу ооцист у мелких (42), а средняя доля зараженных (85 %) совпала.

Не обнаружено разницы и в сохранении возбудителя в сравниваемых группах комаров (табл. 2). Показатели сохранения для крупных и мелких особей отличаются менее чем на 10 %. Конечно, отсутствие статистически значимой разницы не является доказательством сходства. Но тот факт, что различия не выявились в большом числе опытов, в которых использовано более 300 особей, говорит о том, что если они и имеются, то весьма слабые. Отсутствие разницы в заражаемости комаров разных размеров является подтверждением и объяснением опубликованных ранее данных (Званцов и др. 1989) о том, на заражаемость комаров не влияют условия, в которых происходило их развитие.

2. Сравнение заражаемости особей, выпивших полную и неполную порцию крови. В тех случаях, когда комарам не давали возможности закончить кровососание, т. е. выпить полную порцию крови (табл.3), их зараженность резко снижалась. Причем это снижение не было пропорционально недостатку крови. Когда комары выпивают 20-30 % от полной порции, они почти не заражаются, а когда количество выпитой крови достигает 40 и 50 % от полной порции, зараженность резко повышается. Важно отметить, что значение имеет не абсолютное количество выпитой крови, а относительное (к весу самки). В опытах 7-12 (табл. 3) использованы крупные особи, высасывающие в норме более 2.2 мг крови, но когда им удавалось получить только 0.5 - 0.7 мг они почти не заражались. В опытах 12 и 13, где использованы мелкие особи (насасывающие в норме менее 1.5 мг крови), то же количество крови (0.6 мг) приводило к повышению заражаемости. И все же, даже приняв почти половинную порцию крови крупные комары заражаются достоверно хуже, чем с полной порцией, в отличие от мелких особей, которые по заражаемости не отстают от крупных. Считать полученные результаты ошибкой репрезентативности не приходится - ее вероятность менее 0.01. Если учесть, что аналогичные данные получены в следующей серии из 9 опытов (см. ниже), то надежность вывода возрастает еще больше (Р>0.9999).

3. Влияние докармливания комаров кровью здорового донора на их заражаемость. Тот факт, что на заражаемость влияет относительное количество крови, заставляет предполагать, что в этом процессе большую роль играет растяжение стенок средней кишки. Чтобы проверить это предположение, была поставлена третья серия опытов, где комарам давали возможность заполнить среднюю кишку до отказа, не увеличивая при этом количества заглоченных гаметоцитов. Это достигалось тем, что им не давали выпить полную порцию крови на зараженном доноре, а пересаживали на незараженного, где они докармливались досыта. Количество принятой комарами крови приведено в табл. 4.

Как и в предыдущей серии опытов, комары, не получившие полной порции крови, заражались хуже контрольных (с полной порцией) (табл.4). В 4 опытах из 9 они не заразились совсем. В среднем доля зараженных среди недокормленных составила менее 3 %, что в 30 раз ниже, чем в контроле. Обилие ооцист у них было в 250 раз ниже. И это при том, что крови, а, следовательно, и возбудителя они получали меньше лишь в 4 - 12 раз.

Если комары, получившие неполную порцию крови, были потом докормлены на здоровом доноре, заражаемость их резко повышалась (табл. 4). Она превышала таковую недокормленных (вероятность случайной разницы не более 0.002). Особенно резко возрастала доля зараженных особей, достигая в среднем более половины (62 %) от этого показателя для контрольных комаров. Обилие ооцист возросло не так резко. Оно оказалось близким к тому, которое следовало ожидать, исходя из величины принятой ими порции заразной крови. Эти комары в среднем выпили 0.4 мг заразнойкрови на особь, что составляет 16.0 % от средней полной порции; обилие ооцист у них в среднем 6.3 на особь, что составляет 18.7 % от среднего обилия ооцист у контрольных особей.

Докармливание зараженного переносчика на здоровом доноре не отразилось на сохранении возбудителя (табл. 2). В среднем 86 % особей, имевших ооцисты, имели затем спорозоиты в слюнных железах. У контрольных особей этот показатель примерно таков же (79 %).

Приведенные факты свидетельствуют о том, какую большую роль играет степень заполнения средней кишки комара кровью в процессе заражения его возбудителем малярии. Не так, оказывается, важно абсолютное количество выпитой крови (и соответственно количество заглоченных гаметоцитов), как тот факт, напился ли комар до отказа (до предельного расширения средней кишки), или принял неполную порцию. В последнем случае заражение происходит очень редко. Опыты показали, что для успешного развития возбудителя не обязательно, чтобы вся порция крови была от одного донора, оно происходит и при докармливании на незараженном доноре. При этом число развившихся возбудителей (число ооцист) пропорционально количеству принятой заразной крови (т.е. числу заглоченных гаметоцитов). Обнаруженная зависимость доказывает правомерность предположения Алексеева (1986) о том, что восприимчивость комаров к плазмодиям связана со степенью слипания клеток эпителия средней кишки переносчика. Вероятно, при растягивании выпитой кровью клетки эпителия средней кишки уплощаются и слипание между ними ослабевает, что может облегчить оокинетам проникновение на наружную сторону - под базальную мембрану.

В эпидемиологическом плане полученные данные подтверждают, как важно не допускать контакта комаров с больными и паразитоносителями. Если комар выпьет даже ничтожное количество заразной крови и докормится на здоровом доноре, он станет эпидемически опасным.

Таблица 1. Сравнение заражаемости комаров разного размера.

Таблица 2. Сохранение возбудителя в комарах, выпивших разное количество крови (средние данные по всем опытам каждой серии).

Таблица 3. Заражаемость комаров при законченном (полная порция) и незаконченном (неполная порция) кровососании на цыплёнке, больном малярией.

Таблица 4. Влияние на заражаемость комаров их докармливания на здоровом доноре.

Обозначения: П - комары, получившие полную порцию заразной крови; Н - комары, получившие не полную порцию заразной крови; Д - комары, получившие не полную порцию заразной крови, и докормленные не заразной кровью.

Алексеев А. Н. Возможное значения фактора оптимальных заражающих доз в системе возбудитель-переносчик при малярии. // Мед. паразитол.- 1985.- N 3.- С. 10-17.

Алексеев А. Н. Взаимоотношения возбудителя малярии и беспозвоночного хозяина. // Малярийные паразиты млекопитающих. Протозоология. Вып.II.- Л.: Наука.- 1986.- С. 53-77.

Званцов А.Б., Ясюкевич В.В., Расницын С.П. Влияние условий развития комаров Aedes aegypti L. на их заражаемость Plasmodium gallinaceum Brumpt. Мед. паразитол. 1989, N 6, С. 68-71.

Немировская А. И. Закон реинокуляции при малярии. // Мед. паразитол.- 1941.- N 3-4.- С. 324-339.

Плохинский Н. А. Биометрия.- Новосибирск.- 1961.- 364 С.

Расницын С.П., Жарова А.Н. Отсутствие влияния повторного кровососания комаров на их зараженность возбудителем малярии. Паразитология. 1984, т. 18, N 2, С. 179-181.

Сравнение заражаемости комаров возбудителями малярии при кровососании на человеке и через мембрану.

Применение искусственного кормления насекомых кровью (через мембрану) с целью определения их восприимчивости к возбудителям болезней человека весьма перспективно и довольно широко распространено. Преимущество этого метода связано с отсутствием прямого контакта человека с переносчиком. Описано много способов кормления насекомых через мембраны (3, 8). Этот метод применяется для изучения биологии переносчиков и определения заражения их возбудителями инфекций (1, 2, 5, 6).

Цель настоящей работы оценить возможности заражения комаров возбудителями малярии при кормлении их через биомембрану и сравнить этот метод с заражением их непосредственно на человеке.

Для экспериментов использовали комаров Anopheles atroparvus из лабораторной культуры Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского и штамм Plasmodium vivax, выделенный от больного, заразившегося в Народной Демократической Республике Йемен (о. Сокотра). Опыты по изучению заражаемости комаров на человеке проводили на больных, нуждающихся в маляриотерапии.

В опыт брали комаров 5 - 10-дневного возраста (в каждой партии было особи одного возраста), ни разу не получавших крови и содержавшихся при температуре 24-26^оС и влажности около 70 %. они получали воду и 10 % раствор глюкозы. За сутки до заражения комаров лишали воды и глюкозы, а за 2-3 часа до заражения их помещали в условиях пониженной влажности (около 50%).

Во время кормления комары находились в маленьких садках (куб с ребром 10 см) в темноте. На больном комаров кормили, помещая садок с ними на обнаженную поверхность бедра на 30-40 минут.

Искусственное кормление осуществляли с помощью аппарата, описанного Rutlage и соавт. (7). Мембраной служила шкурка молодой белой мыши. Кровь брали из локтевой вены больного, смешивали с консервантом (3.8 % цитрата натрия или ЦОЛИПК 7 Б) в соотношении 4:1. Перед кормлением комаров кровь переливали в кормушку и подогревали до 37^оС. Для предотвращения оседания эритроцитов каждые 5-7 минут кровь в кормушке перемешивали. Длительность кормления на человеке и через мембрану была одинаковой.

Сразу же после кормления напившихся комаров отсаживали в садок большего размера и помещали в прежние условия. С 4-го по 11-й день комаров вскрывали для обнаружения ооцист и с 12-го дня - на наличие спорозоитов. Заражаемость комаров оценивали по доле особей, содержащих возбудителя, а интенсивность заражения - по числу ооцист на желудке и количеству спорозоитов в слюнных железах. Обилие спорозоитов оценивали по следующей шкале: от 1 до 10 на препарат, приготовленный из слюнных желез 1 комара - 1 балл, от 11 до 100 спорозоитов - 2 балла и более 100 спорозоитов - 3 балла.

В препаратах, приготовленных из крови, взятой из пальца у больных во время кормления комаров, а также из крови, подготовленной для искусственного кормления, подсчитывали число мужских и женских гаметоцитов на 500 лейкоцитов.

Схема опыта: каждую партию комаров делили на две группы, 1-ю кормили на больном, 2-ю - через мембрану. Кровь для кормления комаров второй группы брали у больного из вены непосредственно перед кормлением на нем комаров первой группы или сразу после него. Между взятием крови и кормлением комаров через мембрану проходило 1.5 - 2 ч.

Всего провели 9 опытов на 6 больных. Для удобства сравнения во всех таблицах одни и те же опыты обозначали одинаковыми номерами.

1. Привлекательность для комаров кормушки с кровью. При сравнении числа комаров, напившихся на человеке и через мембрану (табл. 1), было отмечено, что они в обоих случаях питались одинаково охотно (на человеке в среднем насосалось крови 57 % комаров, а через мембрану - 59 %).

2. Обилие половых форм возбудителя в крови, которой кормили комаров. В табл.2 приведены результаты определения числа гаметоциов в разных участках кровяного русла у одного больного. Для мужских гаметоциов коэффициент корреляции между их числом в разных участках кровяного русла равен 0.98±0.07, для женских - 0.99±0.07. Число гаметоцитов, приходящееся на 500 лейкоцитов в периферической крови, хотя и незначительно (на 10 %), но все же достоверно, ниже, чем в венозной (P<0.05).

Исследования показали, что в крови с консервантом половые формы паразитов сохранялись в течение срока, значительно превышающего таковой между взятием крови у больных и кормлением комаров (табл.3).

3. Заражаемость комаров при разных способах кормления кровью. В обоих сравниваемых способах кормления кровью комары заражались практически одинаково (табл.4). Ооцисты были обнаружены у 36 % самок, накормленных на человеке, и у 34 % самок, накормленных через мембрану, спорозоиты соответственно - у 24 и 20 %. Показатели обилия ооцист также существенно не отличались. Во всех опытах доля комаров со спорозоитами немного ниже доли комаров с ооцистами. Эта разница не случайна (P<0.01). Объясняется она, по-видимому, тем, что у части особей либо задерживалось развитие ооцист, либо спорозоиты не достигали слюнных желез. Такое же явление было отмечено в опытах Collins и соавт. (4).

При сравнительной оценке заражаемости комаров возбудителем малярии установлено, что испытанные методы дают очень близкие результаты. В обоих случаях комары одинаково охотно насасываются крови. Доля зараженных особей в обоих случаях различается не существенно. (Эта разница вызвана разведением крови консервантом). Показатели интенсивности заражения переносчиков различаются также несущественно.

Полученные результаты аналогичны данным других авторов, изучавших заражаемость Aedes aegypti возбудителем малярии птиц (5) и тропической малярии (9).

Метод искусственного кормления комаров кровью вполне приемлем для изучения восприимчивости малярийных комаров к возбудителям малярии. Кроме того, наши опыты показали высокую восприимчивость исследованной популяции An. atroparvus к южноаравийскому штамму P.vivax.

3. Collins W. E., Harrison A. J., Skinner J. C. // Mosquito News.- 1964.- Vol. 24.- P. 25-27.

4. Collins W. E., Contacos P. G., Richardson B. B. et al. // Am . J. trop. Med. Hyg.- 1976.- Vol. 25.- P. 372-375.

6. Gordon R. M. // Ann. trop. Med. Parasit.- 1922.- Vol. 16.- P. 425 Ru64-407-419.

7. Rutlage L. C., Ward R. A., Gould D. // Mosquito News.- 1964.- Vol. 24.- P. 407-419

Таблица 1. Питание комаров на человеке и через мембрану.

Таблица 2. Число гаметоциовна 500 лейкоцитов в крови больных.

Таблица 3. Число гаметоциов (на 500 лейкоцитов) в крови с консервантом в разные сроки после ее взятия.

Таблица 4. Зараженность комаров и обилие в них возбудителей при разных способах кормления кровью.

N опыта	Наличие ооцист при кормлении						Наличие спорозоитов при кормлении
	на человеке			через мембрану			на человеке			через мембрану
	А	Б	В	А	Б	В	А	Б	Г	А	Б	Г
1	32	22	1.6	16	19	2.0	32	16	2	18	11	1
2	20	30	2.0	31	23	3.0	15	27	1	47	15	2
3	10	60	9.8	39	33	19.5	23	35	3	33	27	2
4	12	33	2.5	16	38	2.0	21	24	2	40	15	2
5	10	60	18.3	14	43	6.0	28	18	2	18	28	1
6	14	29	1.8	14	29	1.5	13	23	1	25	20	2
7	4	50	1.0	8	38	2.3	10	30	1	20	15	2
8	9	44	48.0	12	50	10.1	7	29	2	25	24	2
9	13	38	1.2	14	29	1.2	20	30	2	30	23	2

Обозначения:. А - число вскрытых комаров, Б - % зараженных особей, В - среднее число ооцист на зараженный желудок, Г - максимальной обилие спорозоитов в баллах

шрытых комаров, Б - % зараженных особей, В - среднее число ооцист на зараженный желудок, Г - максимальной обилие спорозоитов в баллах.

Review of Data on Susceptibility of Mosquitos in USSR to imported strains of Malaria Parasites.

(Обзор данных по восприимчивости комаров фауны СССР к завезенным штаммам малярийных паразитов.)

Эта статья рассматривает данные о восприимчивости комаров Советского Союза к завезенным из Азии и Африки штаммам возбудителей малярии. В дополнение к ранее опубликованным сведениям статья содержит также результаты экспериментов, выполненных авторами.

В настоящее время малярия завозится во многие страны, включая и СССР, которые раньше были свободны от этой инфекции (1-4), что приводит к развитию местных очагов заболевания (3, 5-8). Циркуляция возбудителя зависит в первую очередь от восприимчивости местной популяции комаров к завезенным видам и штаммам малярийного плазмодия, т. е. от способности паразита достигать в комаре заражающей стадии спорозоита. Изучение восприимчивости комаров к возбудителю малярии является важным аспектом программ по борьбе с малярией. Кроме того, сравнение восприимчивости видов, являющихся переносчиками малярии к различным видам и штаммам паразита могут быть использованы при изучении межвидовых различий паразитов (ксенодиагностики).

Многие виды комаров, обнаруженные в СССР, эндемичны для этой территории. Поэтому информация о восприимчивости зарубежных комаров (9-13) к ним не относится.

Систематическое изучение восприимчивости комаров Советского Союза к зарубежным штаммам малярии было начато в 1975 году. До этого такие данные были получены только Тибурской (14,15), которая показала, что Anopheles atroparvus восприимчивы к 3 штаммам Plasmodium vivax из юго-восточной Азии.

К настоящему времени исследованы 4 вида комаров: An. atroparvus, An. messeae, An. sacharovi, An. subalpinus. Они оказались восприимчивыми к аллопатричным штаммам P. vivax (табл.1). Согласно опубликованным данным P. vivax имеет широкий круг переносчиков. Это позволяет предполагать, что виды комаров, способные передавать местные штаммы малярии, будут восприимчивы и к завозимым штаммам. Широкие границы потенциальных переносчиков P. vivax дают возможность его легкому распространению. У An. maculipennis (табл.2) развитие паразита до стадии ооцисты одинаково у всех штаммов, но доля доживших до спорозоитов различается. Ооцистно-спорозоитный индекс (т. е. доля комаров с ооцистами которые затем развились в спорозоиты) у An. messeae (21%) был значительно ниже чем у An. atroparvus (62%) и An. sacharovi (59%). И эта разница достоверна (Р<0.01). То есть развитие ооцист в спорозоиты происходит гораздо реже у An. messeae, чем у других видов. Причина может быть либо в разрушении спорозоитов, либо их неспособностью достигать слюнных желез (17).

Сравнение развития различных штаммов P. vivax в одних и тех же видах комаров показывает лишь незначительные различия в восприимчивости переносчиков. При этом все имеющиеся различия связаны с различным первоначальным уровнем паразитемии и небольшим объемом материала. Следовательно, есть основания предполагать, что P. vivax однороден по отношению к переносу комарами в пределах всего набора переносчиков. Однородность P. vivax объясняет возможную опасность, связанную с заносом любого штамма из любой части его ареала.

Результаты изучения восприимчивости комаров к завезенным штаммам P.falciparum представлены в табл. 3. An. atroparvus и An. messeae не восприимчивы к штаммам P.falciparum из Африки и юго-восточной Азии. Полученные данные согласуются с ранее опубликованными (10, 11).

Опыты по определению восприимчивости An. sacharovi к завезенным штаммам P.falciparum показали противоположные результаты. В большинстве случаев (21 опыт на 300 комарах) развития паразитов не наблюдалось, но некоторые дали положительный результат. Для решения этого вопроса необходимы дополнительные эксперименты.

В опытах по заражению An. subalpinus африканским штаммом P.falciparum в слюнных железах комаров были найдены спорозоиты.

Развитие P.falciparum в An. sacharovi и An. subalpinus дает возможность полагать, что другие южные виды комаров могут быть также восприимчивы к тропическим штаммам паразитов. Для проверки этого предположения необходимы дальнейшие исследования.

Наши исследования показали различия в уровне адаптации к переносчикам разных штаммов P.falciparum. An. atroparvus, An. messeae и An. sacharovi являются эффективными переносчиками местных штаммов паразита, но в отношении завозных штаммов первые два - невосприимчивы, а последний может быть восприимчив в отдельных случаях. Похожие результаты были получены исследователями в других странах (9, 10). Это показавает, что P.falciparum неоднороден в пределах своего ареала (19).

Изучение восприимчивости комаров к завезенным штаммам P. ovale и P.malariae проводилось в небольших объемах, так как завоз этих видов в СССР происходит редко. Во всех опытах (табл. 4) развития этих паразитов в An. atroparvus не было установлено. В отношении P. ovale полученные результаты дают возможность предположить низкий уровень адаптации (если она вообще существует) этого вида плазмодия к изученным видам комаров

Таблица 1. Восприимчивость комаров фауны СССР к завезенным штаммам P. vivax.

Источник штамма	N	Обилие гаметоцитов		Ооцисты				Спорозоиты
		микро	макро	n		ОИ		n		СИ
An. sacharovi
Лаос	2	144-220	132-325		41		29		23	17
An. atroparvus
Лаос	3	70-220	139-325		67		34		28	7
An. messeae
Нигерия	1	30	51		33		12		41	7
Индия	2	71-96	134-170		38		13		8	12
Пакистан	3	17-44	32-90		43		5		40	5
Йемен	13	12-325	325-541		21		25		275	15
Лаос	5	63-220	123-325		273		24		134	15
Бразилия	8	49-555	55-230		98		15		46	14

Примечание: Обилие гаметоцитов приведено по их числу на микролитр. В случае нескольких опытов с одним штаммом указаны предельные значения этого показателя.

Таблица 2. Результаты заражения видов комплекса An. maculipennis к штаммам Pl.vivax из НДР Лаос.

Таблица 3. Результаты заражения комаров завезенными штаммами P.falciparum.

Обозначения: ЦАР = Центрально-африканская респ. L = источник сведений; Чш - число штаммов; Чо – число опытов; Чж – число особей, исследованных на ооцисты; Чс = число особей, исследованных на спорозоиты; Ж = число женских гаметоцитов на 1 мкл крови. М = число мужских гаметоцитов на 1 мкл крови.

Там, где проведено несколько экспериментов, даны минимальные и максимальные значения.

Таблица 4. Результаты заражения A. atroparvus завезенными штаммами P. ovale и P. malariae.

1. Сергиев П. Г. и др. Малярия в СССР в 1963-1965 г и пути ее предупреждения в 1966-1970 // Мед. паразитол.- 1966.- Т. 35.- С. 444-457

2. Немировская А. И. Сравнительный анализ завезенной малярии. // Мед. паразитол.- 1969.- Т. 38.- С. 200-206

3. Чагин К. П. и др. Проблема завоза малярии в СССР. // Мед. паразитол. - 1975.- Т.44.- С. 396-405

4. Дашкова Н. Г. и др. Завоз малярии в Москву из-за границы. // Мед. паразитол.- 1978.- Т.47.- С. 105-109.

5. Ambroise - Thomas P. et al. Reappearans of malaria in Corsica. Importans of a sero-epidemiological survey. // Bull. de la Societe de Pathologie exotique et de ses filiales.- 1972.- Vol. 65.- P. 533-542

6. de Zulueta J. Malaria eradication in Europe: the achievement and the difficulties ahead. // J. of tropical medicine and hygiene.- 1973.- Vol. 76.- P. 279-282

7. Schultz M. G. Imported malaria. // Bull. World Health Organization.- 1974.- Vol. 50.- P. 329-336

8. Чагин К. П. Завоз малярии в СССР и предупреждение его эпидемиологических последствий. // В сб.: Актуальные проблемы этиологии, патогенеза, клиники и лечения тропических болезней.- М.- 1976.- С. 19-21

9. Games F. Some general resulta of a study of induced malaria in England. // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene.- 1931.- Vol. 24.- P. 478-534

10. Shute P.G., Maryon M. Studies in transmission of P. malariae by Anopheles mosquitoes. // Parasitology.- 1951.- Vol. 41.- P. 292-300

11.de Zulueta J. et al. Receptivity to malaria in Europe. // Bull. of the World Health Organization.- 1976.- Vol. 52.- P. 109-111

12. Collins W. E. et al. Studies on human malaria in Aotus monkeys. I. Sporozoite transmission of P. vivax from

El Salvador

. // J. of parasitology.- 1973.- Vol. 59.- P. 606-608

13. Collins W. E. et al. Studies on human malaria in Aotus monkey. 6. Infectivity of Plasmodium malariae to different anofelins. // J. of parasitology.- 1975.- Vol. 61.- P. 941-943

14. Тибурская Н. А. Продолжительность инкубационного периода при малярии вызванной Корейским штаммом P. vivax . // Мед. паразитол. - 1962.- Т. 31.- С. 643-648

15. Тибурская Н. А. Описание штаммов возбудителя трехдневной лихорадки, вызыващей острую инфекцию после непродолжительной инкубации. // Мед. паразитол. - 1965.- Т. 34. - С. 667-672

16. Boyd M. F., Kitchen S. F. The comparative susceptibility of Anopheles quadrimaculatus, Say and Anopheles punctipennis, Say to Plasmodium vivax, Grassi and Feletti and Plasmodium falciparum Welch. // Amer. J. of tropical medicine.- 1936.- Vol. 16.- P. 67-73

17. Collins W. E. et al. Development of different strains of Plasmodium vivax in two species of Anopheles. // Amer. J. of tropical medicine and hygiene.- 1976.- Vol. 25.- P. 373-375

18. Collins W. E. et al. Studies of human malaria in Aotus monkeys. 7. Comparative infectivity of two strains of P. vivax to An. freeborni, An. maculatus and four strains of An. albimanus. // J. of parasitology.- 1976.- Vol. 62.- P. 490-494

19. Лысенко А. Я., Бароян О. В. Малярия. // В кн.: Новые аспекты тропической патологии.- М., Медицина.- 1979.

20. Daskova N. G. Zarazyavanie na An. m. atroparvus s vneseni Schamove na tridnevna malaria i tyahnoto epidemiologicno znacenie. // Letopisi na higienno-epidemiologicnata sluzba.- 1977.- Vol. 4.- P. 160-164

21. Бибикова В. А. Экспериментальное изучение восприимчивости комаров к завезенным штаммам возбудителя человеческой малярии. // Тез. докл. XVI Всесозн. съезда микробиол. и эпидемиол.- Ульяновск.- 1977.- С. 259-261

22. Дзавадов Р. Б. и др. О восприимчивости комаров Anopheles m. sacharovi и Anopeles m. subalpinus к инфицированию возбудителем тропической малярии из Африки. // Мед. паразитол.- 1978.- Т. 47.- С. 84-87

Сохранение возбудителя малярии в комарах, получивших сублетальные дозы инсектицида.

Применение инсектицидов в борьбе с переносчиками возбудителей болезней человека далеко не всегда вызывает гибель всех целевых объектов. Часть особей (в силу ряда причин: резистентность, кратковременность контакта, низкая концентрация препарата и т. п.) получает сублетальную дозу инсектицида и остается живой. Для того чтобы правильно оценивать эффективность проведенных мероприятий, важно знать не только численность оставшихся, но и их векторные способности. Особенно важно знать, сохраняется ли возбудитель в переносчике, контактировавшем с ядом.

Известно, что сохранение и развитие возбудителя в переносчике зависит от физиологического состояния последнего (5, 19, 20) и от питания переносчика (6, 7. 11, 18, 21). На этот процесс влияют также внешние факторы: биологические (1), физические (3, 13, 14), химические (12, 16). Поскольку инсектициды оказывают существенное влияние на протекание биохомических и физиологических процессов в организме насекомых (2, 4, 8, 15, 17), нельзя исключить, что они прямо или косвенно могут затронуть и развитие возбудителя.

Несмотря на большую практическую важность вопроса о сохранении возбудителя в переносчиках, получивших сублетальные дозы инсектицида, ему уделялось мало внимания. Опубликованные работы (9, 10) показали, что постоянное содержание комаров в обработанных инсектицидом садках не снижает доли зараженных особей. Такой опыт дает лишь первое грубое представление о влиянии инсектицида. Он не позволяет учесть возможные различия в чувствительности разных стадий возбудителя и не позволяет судить о возможном влиянии инсектицида на обилие возбудителя в переносчике.

Задачей настоящей работы было оценить сохранение возбудителя малярии в комарах, получивших сублетальные дозы ДДТ на разных стадиях развития возбудителя. Особое внимание было уделено определению количественных характеристик.

Работа выполнена на модели Plasmodium gallinaceum Brumpt и Aedes aegypti (L). Оценивалось возможное влияние инсектицида на возбудителя в разные периоды его развития: 1) в период прохождения полового процесса (через час после приема комаром заразной крови); 2) в период жизни оокинеты (через сутки после приема крови); 3) в начальный период развития ооцист (через 2-3 суток после приема крови); 4) в период окончания созревания ооцист (через 6 суток после приема крови); 5) после окончания спорогонии (через 10-12 суток после приема крови).

Опыты ставились следующим образом: партию одновозрастных комаров кормили кровью больного малярией цыпленка. Из партии выбраковывали всех особей, кроме тех, что получили полную порцию крови. Накормленных комаров держали в термостате при 27-28⁰ и влажности 90-95 %, давая им возможность питаться раствором глюкозы. Через определенное время при достижении возбудителем заданной стадии развития партию комаров делили на две группы, одну из которых (опыт) подвергали 30-40 минутному контакту с бумагой, пропитанной 4 % раствором ДДТ, по методике ВОЗ (5), а другую оставляли интактной. После контакта комаров возвращали в прежние условия и выдерживали до образования у них зрелых ооцист или спорозоитов. Затем комаров вскрывали и определяли у них наличие возбудителя и (в случае наличия) подсчитывали число ооцист.

Данные по объему исследованного материала приведены вместе с результатами.

Во всех вариантах опытов зараженность комаров, получивших сублетальные дозы инсектицида, существенно не отличались от аналогичного показателя у контрольных (интактных) комаров. Несмотря на исследование большого количества особей (более 1000), существенных различий ни в доле зараженных особей, ни в обилии возбудителя в переносчике выявить не удалось.

Микроскопические исследования возбудителя малярии в комарах, получивших сублетальные дозы инсектицида в разные периоды развития в них возбудителя, не выявили патологии спорозоитов. Проведено 3 кормления зараженных комаров, контактировавших с ДДТ, на здоровых цыплятах. Во всех случаях произошло заражение позвоночного хозяина, показавшее, что возбудитель не только сохраняется, но и не утрачивает вирулентность.

Контакт Aedes aegypti с сублетальными дозами ДДТ не повлиял на выживаемость в них Plasmodium gallinaceum, однако этот факт не является доказательством того, что эффекта не будет всегда (при других инсектицидах и других ксено-парах).

1. Получение комарами сублетальных доз инсектицида ДДТ не вызывает гибели в них возбудителей малярии ни на одном из этапов развития плазмодия.

2. Получение комарами сублетальных доз инсектицида ДДТ не вызывает снижения вирулентности находящихся в нем возбудителей малярии.

3. Комары, зараженные возбудителем малярии и уцелевшие от обработок инсектицидом ДДТ, сохраняют эпидемиологическую опасность в качестве переносчиков.

3. Christensen B.M., Hollander A. L. // Proc. helmint. Soc. Wash.- 1978.- Vol. 45.- P. 115-119.

4. Dabbour A. L., Ahmed Y. M. // Meded. Fac. landbouwwetensch Rijksuniv. Gent.- 1979.- Vol. 44.- P. 229-233.

5. Distelmans W., Haeseleer F.D., Kaufman L. et al. // Ann. Soc. belge Med. trop.- 1982.- Vol. 62.- P. 41-47.

7. Ghost T. N., Ray H. N. // Bull. Calcutta Sch. trop. Med.- 1957.- N 5.- P. 27. iKa80-149-152

8. Karabensch K., Otto D. // Arch. Phytopath. u. Planzenschutz.- 1980.-Bd. 16.- S. 149-152. iMo55-287-296

11.Moloo S. K. Effects of maintaining Glossina morsitans on different hosts upon the vector's subaequent infection rates with pathogenic trypanosomes. // Acta trop.- 1981.- Vol. 38., N 2.- P.125-136.

15.Samaranayaka-Ramasamy M. // In: International Congress of Entomology 15th.- London.- 1978.- P. 83-93.

16. Sharma V. P., Das M., Bendle M. S. et al. // J. Commun Dis.- 1981.- Vol. 13.- P. 17-25.

17.Srivastava H. C., Verma G. S. // Z angew. Zool.- 1980.- Vol. 67.- P. 233-238.

18.Steward G. L.,Soifer F. K., Steward J. B. // J. Invert. Path.- 1979.- Vol. 33.- P.75-80.

20.Terzian L. A., Stahler N., Irreverre F. // J. Immunol.- 1956.- Vol. 76.- P. 308-313. iWe73-426-431

Табл. Зараженность комаров возбудителем малярии после разных вариантов контакта их с инсектицидом

Период

развития

возбудителя

Контакт

с ДДТ

Доля особей, погибших от контакта с ДДТ, %

ОИ

ОО

III

118

206

144

202

–

В среднем

454

651

Отсутствие влияния повторного кровососания комаров на их зараженность возбудителем малярии.

Вопрос о влиянии повторного кровососания комаров на сохранение в них возбудителей болезней человека имеет прямое эпидемиологическое значение. От этого влияния зависит эффективность мероприятий, направленных на сокращение контакта переносчиков с человеком. Кроме того, от ответа на этот вопрос зависит возможность использования разных экспериментов.

Питание кровью изменяет физиологическое состояние комаров (Clements, 1963),. Поскольку полость тела комара служит средой обитания плазмодия, есть все основания ожидать, что изменение состояния комара отразится на развитии в нем возбудителя. Это предположение в первую очередь относится к плазмодиям малярии, поскольку вся его жизнь связана с органами пищеварения комаров.

Состояние хозяина, как правило, отражается на состоянии обитающих в нем паразитов. Известно, например, что развитие бесполого поколения плазмодий тормозится белково-энергетической недостаточностью пищи хозяина (Edirisinghe e. a., 1981), а выживаемость, например трипаносом в мухах цеце, зависит не только от кровяного питания, но даже от видовых особенностей доноров крови (Moloo, 1981).

Несмотря на очевидную важность вопроса, изучение влияния повторного кровососания комаров на развитие в них возбудителей малярии уделялось мало внимания. Имеются лишь 2 работы (Ghoch, 1980; Ghoch, Ray, 1957), в которых показано, что повторное кровососание комаров ускоряет развитие в них возбудителя малярии. Влияние повторного кровососания комаров на выживание возбудителя не исследовано. Оценке этого влияния посвящена данная работа.

Исследования выполнены на модели Aedes aegypti (L.) - Plasmodium gallinaceum Brumpt. Опыты проводились следующим образом. Партии совместно выращенных комаров давали возможность сосать кровь зараженного цыпленка. Самок набравших полную порцию крови (что определялось по характерному увеличению размеров брюшка и по отказу от дальнейшего кровососания), делили на 2 группы: К (контрольные, получающие кровь) и Г (опытные, кровь не получающие). Особей группы К в период между заражающим кормлением и вскрытием 1 - 2 раза (по мере завершения гонотрофических циклов) кормили кровью, оставляя для опыта лишь особей, набравших полную порцию. Особей группы Г кровью в этот период не кормили. За исключением кормления кровью все условия содержания обеих групп были идентичными: рассеянный свет около 4 ч в сутки, температура 27 - 29^оС, относительная влажность 80-95 %, подкормка 10 % раствором глюкозы. Из каждой группы комаров одной партии одновременно брали особей на вскрытие, определяли или наличие и число ооцист на желудках, или наличие спорозоитов в слюнных железах. Объем материала приведен вместе с результатами.

В табл. 1 приведены данные, характеризующие зараженность комаров возбудителем малярии на стадии ооцисты. Полученные результаты не обнаруживают достоверной разницы между контрольными и опытными комарами ни в доле зараженных особей, ни в обилии возбудителя у заразившихся комаров. Единственно, что можно отметить, это повышенную вариабельность количества плазмодий у особей контрольной группы.

Точно также (табл. 2) не обнаружено различий в зараженности комаров, питавшихся и не питавшихся кровью повторно, возбудителем на стадии спорозоита.

Отсутствие статистически достоверной разницы не является, конечно, доказательством сходства. Однако, поскольку различия не выявились при анализе достаточно обширного материала (5 опытов, в которых исследовано 380 особей) при различном уровне зараженности комаров и различном обилии в них возбудителя малярии, можно заключить, что если отсутствие повторного кровососания комаров и подавляет развитие в них малярийного плазмодия, то лишь в весьма малой степени.

Отсутствие повторного кровососания комаров не приводит к гибели в них возбудителя малярии.

1. Clemens A. N. The physiology of mosquitos.-London-Jork- Paris.- Oxford Pergamon Press.- 1963.-Vol. 4.- 393 P.

2. Edirisighe J.S., Targett G. A. T., Fern E. B. Dietary suppression of rodent malaria. // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg.- 1981.- Vol. 75.-P. 183.

3. Ghosh T.N. Behaviour of Plasmodium gallinacium in Aedes aegypti. // 4th Proc. Indian Nat. Sci. Acad.- 1980.- Vol. 46., N 6.- P. 852-854.

4. Moloo S. K. Effects of maintaining Glossina morsitans on different hosts upon the vector's subaequent infection rates with pathogenic trypanosomes. // Acta trop.- 1981.- Vol. 38., N 2.- P.125-136.

Таблица 1. Сравнение зараженности комаров возбудителем на стадии ооцисты

Таблица 2. Сравнение зараженности комаров возбудителем на стадии спорозоита

Плодовитость комаров Aedes aegypti в связи с их зараженностью возбудителем малярии Plasmodium gallinaceum.

Изучение влияния возбудителя малярии на комаров-переносчиков имеет большое практическое значение. Нельзя исключить, что под влиянием плазмодиев изменяется жизнедеятельность комаров, и эти изменения следует учитывать при разработке стратегии и тактики борьбы с ними. В научной литературе нет единого мнения по затронутому вопросу. Наряду с работами, показывающими наличие существенных изменений в переносчике под влиянием возбудителя, имеются данные, из которых следует, что такое влияние отсутствует (Garnham,1955; Gad e.a.,1979 и др.). Задача настоящей работы - определить, сказывается ли паразитирование Plasmodium на плодовитости комаров. Мы выбрали именно эту характеристику, поскольку известно, что плодовитость - морфофизиологический индикатор, наиболее чутко реагирующий на изменение состояния организма комаров (Расницын, 1986). Аналогичные исследования, выполненные ранее, не дают однозначного ответа на поставленный вопрос. По данным одних авторов (Freier, Friedman, 1976; Hacker, 1971), наличие возбудителя угнетает, а по данным других (Hacker, Kilama, 1974) не оказывает существенного влияния на плодовитость комаров. Кроме того, до настоящего времени возможность влияния возбудителя малярии на плодовитость комаров исследовалась только на первом гонотрофическом цикле (после приема заразной крови), т. е. лишь на начальном этапе его развития.

В предлагаемой работе исследована возможность влияния возбудителя малярии на плодовитость переносчика в разные периоды спорогонии вплоть до ее завершения.

Работа выполнена на модели Aedes aegypti L. - Plasmodium gallinaceum Brumpt. Возможность влияния возбудителя на плодовитость комаров оценивали в начальный период развития возбудителя (через 2-3 суток после заражающего кормления) на I гонотрофическом цикле, в период завершения развития ооцист (через 6-7 суток после заражающего кормления) на II гонотрофическом цикле и после проникновения спорозоитов в слюнные железы (через 11-12 суток) на II и III гонотрофических циклах.

Для опытов комаров выращивали отдельными партиями по стандартной методике, описанной выше (Шагов и др., 1983). Каждую партию разделяли на две группы: опытную и контрольную, которые содержали в идентичных условиях и все операции с которыми проводили одновременно. Условия содержания комаров: температура 27±0.5^о, относительная влажность 90±5 %, освещение рассеянным светом около 4 ч в сутки. В садках с комарами постоянно находились ватные тампоны, смоченные 10 %-ным раствором глюкозы. Первый раз комаров кормили кровью в возрасте 2-5 суток, одновременно контрольных - на здоровом цыпленке, "опытных" - на больном малярией. Все дальнейшие кормления кровью сравниваемых групп проводили также одновременно на одном и том же здоровом цыпленке. После каждого кормления оставляли только тех особей, которые выпили полную порцию крови, что определялось по характерному расширению брюшка и отказу от дальнейшего кровососания. Отбор напившихся особей проводил всегда один и тот же человек. Таким образом, были сведены к минимуму различия в количестве крови, выпитой разными особями, и исключено избирательное влияние этого фактора в отношении разных групп комаров. Плодовитость комаров определялась после завершения переваривания крови путем подсчета числа яиц в фолликулах (на IV - V стадии по Кристоферсу).

При данной температуре созревание ооцист длится не менее 7 и не более 11 суток (к этому времени у всех зараженных комаров в слюнных железах появляются спорозоиты). Созревание яиц до V стадии по Кристоферсу происходит за 2-3 суток. Для того чтобы сравнить плодовитость комаров в поздние сроки спорогонии (после того как закончиться I гонотрофический цикл), их, как указывалось выше, повторно 1-2 раза кормили кровью. Причем повторные кормления осуществлялись за 2 суток до достижения возбудителем требуемой стадии, что позволяло одновременно определять плодовитость особи и наличие у нее возбудителя (а также его количество).

В результате анализа зараженности комаров опытная группа подразделялась на две: заразившихся комаров (возбудитель был обнаружен) и не заразившихся (возбудитель не обнаружен). Данные по каждой из этих групп приводятся отдельно.

Всего проведено 8 опытов, в которых исследовано 415 комаров.

Проведенные исследования не выявили существенного влияния возбудителя на плодовитость комаров. Число яиц у зараженных и незараженных особей на первой гонотрофическом цикле (в начальный период развития возбудителя) отличались не более чем на 25 % (табл. 1), и во всех случаях разница была статистически недостоверна. На таком же уровне находятся различия в плодовитости особей в период завершения развития ооцист (табл. 2).

Сопоставление числа развивающихся в комарах ооцист и числа яиц у тех же особей не выявило никакой корреляции между этими показателями (табл. 1, 2). Такое же отсутствие корреляции между обилием возбудителя и плодовитостью комаров отмечено и в другой работе (Hacker, Kilama, 1974). Эти факты являются еще одним свидетельством в пользу отсутствия влияния возбудителя на плодовитость переносчика. После завершения спорогонии, когда спорозоиты находятся в слюнных железах комаров, плодовитость последних также не отличается от плодовитости незараженных особей (табл. 3).

Наши исследования проведены при разном уровне заражения комаров, что достигалось с использованием доноров с разным уровнем паразитемии. Полученные данные основываются на достаточно большом материале (8 опытов, в которых исследовано 415 особей), чтобы с уверенностью утверждать, что наличие P. gallinaceum при данном уровне заражения комаров не вызывает существенного угнетения воспроизводительной функции Ae. aegypti. Косвенным подтверждением нашего мнения об отсутствии влияния плазмодиев на плодовитость комаров служат результаты опытов Hovanitz (1947), анализ которых позволяет выявить прямую корреляция между количеством яиц и ооцист у комаров. (Этот результат объясняется методом эксперимента. В опытах Hovanitz анализировались все особи, независимо от количества принятой ими крови. В результате и получилось: те особи, которые выпили больше крови, развили больше яиц и получили больше возбудителя.)

Развитие плазмодиев малярии в комарах не сказывается на репродуктивной функции последних. Единственно, что можно связать с влиянием возбудителя - это повышенную вариабельность числа яиц, развивающихся у заразившихся комаров, по сравнению с контрольными. Такое явление наблюдается во всех опытах, выполненных в период развития ооцист, а также в 3 из 4 опытов после завершения спорогонии.

Волозина Н. В. Роль экологических факторов в изменении потенциальной плодовитости комаров рода Aedes. //В кн.: Вопросы экологии и охраны черноземной зоны РСФСР.- Иваново.- 1978.- С. 41-46.

Расницын С.П. Анализ применимости показателей, характеризующих размеры, вес и плодовитость комаров в качестве морфофизиологических индикаторов. Паразитология. 1986, т. 20, N 2, С. 106-111.

Шагов Е.М., Расницын С.П., Уланова Г.И. Демина В.Т. Тест-насекомые при разработке и производстве микробиологических препаратов. Депонент ОНТИТЭМикробиопром 05.09.83, N 160-деп. С. 1-10.

Freier J. E., Friedman S. Effect of host infection with Plasmodium gallinaceum on reproductive capacity of Aedes aegypti. // J. Invert. Pathol.- 1976.- Vol.28., N 2.- P. 161-166.

Gad A. M., Maier W. A., Piekarski G. Pathology of Anopheles stephensi after infection with Plasmodium berghey berghey. 1. Mortality rate. // Z. Parasitenk.- 1979.-Vol. 60., N 3.- 249-261.

Garnham P. C. C. The comparative pathogenecity of protozoa in their vertebrate and invertebrate hosts. // Soc. Gen. Microbiol. Mechanism of Microbial Pathogenecity Symp. V.- Cambridge.- In: Mechanisms of microbial pathogenecity.- Cambridge Univ. Press.-1955.- P. 191-200.

Hacker C. S. The differential effect of Plasmodium gallinaceum on the fecundity of several strains of Aedes aegypti. // J. Invert. Patol.- 1971.- Vol. 18., N 3.- 373-374.

Hacker C. S., Kilama W. L. The relationship between Plasmodium gallinacium density and the fecundity of Aedes aegypti. // J. Invert. Patol.- 1974.- Vol. 23., N 1.- P. 101-105.

Hovanitz W. Phisiological factors which influence the infection of Aedes aegypti with Plasmodium gallinaceum. // Amer. J. Hyg.- 1947.- Vol. 45.- P. 67-81.

Таблица 1. Сравнение плодовитости не зараженных и зараженных комаров в начальный период развития в них возбудителя (I гонотрофический цикл).

^*В данном опыте у комаров, пивших кровь больного цыпленка, наличие возбудителя не определяли.

Таблица 2. Сравнение плодовитости незараженных и зараженных комаров в период завершения развития ооцист (II гонотрофический цикл)

Таблица 3. Сравнение плодовитости незараженных и зараженных комаров после завершения спорогонии.

Обозначения: N - номер опыта и гонотрофический цикл

Чувствительность к ДДТ комаров Aedes aegypti, зараженных возбудителем малярии.

Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1985, N 1, С. 15-17.

Мероприятия по борьбе с переносчиками возбудителей болезней человека и сельскохозяйственных животных направлены обычно не на уничтожение насекомых и клещей как таковых, а на достижение эпидемического благополучия - перерыва передачи возбудителя. Как отмечает А. Н. Алексеев (1), воздействие должно быть направлено, прежде всего, на подавление зараженной части популяции членистоногих. При использовании инсектицидов необходимо знать, имеется ли разница в уровне чувствительности зараженных и незараженных особей переносчика. Известно, что наличие возбудителей болезней человека в членистоногих-переносчиках может вызвать существенные изменения в организме последних. Такие изменения были обнаружены, в частности, и у комаров (3, 7, 12), в том числе и под влиянием возбудителя малярии (4, 5, 8, 14). Известно также, что чувствительность членистоногих к инсектицидам зависит от их физиологического состояния (9, 10, 13). Поэтому есть основания ожидать, что зараженные особи переносчика могут реагировать на биологически активные вещества иначе, чем незараженные. И действительно, такие факты были зарегистрированы (6, 11), однако они не касаются возбудителя малярии. Данные, по которым можно было бы судить об изменении чувствительности комаров к инсектицидам под влиянием их заражения возбудителем малярии, отсутствуют.

Материалы и методы

Опыты проводили на модели Aedes aegypti (L) - Plasmodium gallinaceum (Brumpt.). Инсектицид - ДДТ; контакт в течение 30-50 мин с бумагой, пропитанной 4 % раствором препарата по методике ВОЗ (2).

В опытах оценивали долю комаров, погибших от контакта с инсектицидом, в зависимости от наличия и стадии возбудителя. С этой целью партию совместно выращенных насекомых делили на 2 группы, одну из которых кормили на здоровом, а другую - на больном малярией цыпленке. Все остальные манипуляции (кроме вскрытия на зараженность) с особями обеих групп проводили одинаково в одно и тоже время. После кормления кровью в опытах оставляли только особей с полной порцией крови. Комаров содержали при температуре воздуха 27±0.5⁰ и влажности 85-100 % с подкормкой глюкозой. Комаров, оставшихся живыми после контакта с инсектицидом, выдерживали до образования зрелых ооцист, а затем вскрывали и определяли у них наличие возбудителя и количество ооцист на желудках. У комаров, контактировавших с инсектицидом после завершения спорогонии, определяли лишь наличие возбудителя.

Всего проведено 4 варианта опытов по контакту комаров с инсектицидом в различные периоды спорогонии: 1) в период прохождения полового процесса у возбудителя (через час после кормления комаров кровью); 2) в начальный период развития ооцисты (через 2 суток после кровососания); 3) в период окончания развития ооцисты (через 6 суток после кровососания); 4) после завершения спорогонии (через 10 суток после кровососания).

Данные, полученные в ходе опытов, приведены в таблице. Они показывают, что в начальный период спорогонии и после ее завершения смертность комаров под действием инсектицида в сравниваемых парах групп одинакова, а это значит, что синергизм в патогенном влиянии инсектицида и возбудителя на комаров полностью отсутствует. В период развития ооцисты наблюдается статистически достоверное увеличение чувствительности зараженных особей к действию инсектицида, но оно очень невелико.

Полученные факты имеют, вероятно, следующее объяснение: в начальный период развития, когда возбудитель находится еще в желудке комара, возможности его влияния на организм хозяина ограничены самим положением. Выделяемые возбудителем метаболиты попадают в полость кишечника, а не в полость тела. Кроме того, в этот период биомасса возбудителя весьма невелика и потому количество поглощаемых и выделяемых им веществ ничтожно. В период роста ооцист и формирования спорозоитов масса возбудителя нарастает и происходит интенсивный обмен веществ. В этот период он вызывает патологические изменения в комаре (5), что, вероятно, ведет к повышению подверженности его действию инсектицида. После завершения спорогонии и попадания спорозоитов в слюнные железы влияние плазмодиев не проявляется в силу того, вероятно, что метаболизм спорозоитов замедлен по сравнению с периодом их роста и развития. Поскольку спорозоиты находятся в железах внешней секреции, их метаболиты могут удаляться из организма комара со слюной. В конкретной триаде возбудитель - переносчик - инсектицид взаимодействие во влиянии возбудителя и инсектицида на переносчика было выражено очень слабо. Однако это не может служить доказательством отсутствия возможного взаимодействия (синергизма или даже антагонизма) в иных сочетаниях.

1. Плазмодий малярии вызывает ничтожное увеличение чувствительности комаров к инсектициду ДДТ, и то лишь в период роста и раскрытия ооцист.

2. Комары, зараженные возбудителем малярии, будут истребляться с помощью ДДТ также как и незараженные особи.

3. Известно, что взаимоотношение возбудителя и переносчика различно не только между разными парами видов, но и между разными штаммами. Известно также, что различные инсектициды действуют на разные физиологические системы насекомых. Поэтому поиск средств, целенаправленно влияющих на зараженных особей переносчика, остается актуальным.

1.Алексеев А. Н. Основные направления исследований для борьбы с зараженными кровососущими клещами и насекомыми - переносчиками болезней человека//Паразитология. 1979. Т. 13. Вып. 3. С. 185-191.

2. Резисстентность к инсектицидам и борьба с переносчиками. Семнадцатый докл. ком. экспертов ВОЗ по инсектицидам.- М.- 1972.

3. Christensen B. M. // Mosquito News.- 1981.- Vol. 41.- P. 78-81. iFr76-161-166

4. Freier J. E., Friedman S. Effect of host infection with Plasmodium gallinaceum on reproductive capacity of Aedes aegypti. // J. Invert. Pathol.- 1976.- Vol.28., N 2.- P. 161-166.

5. Gad A. M., Maier W. A., Piekarski G. Pathology of Anopheles stephensi after infection with Plasmodium berghey berghey. 1. Mortality rate. // Z. Parasitenk.- 1979.-Vol. 60., N 3.- 249-261.

6. Golder T. K., Otieno L. H., Patel N.G. et al. // Ann. trop. Med. Parasit.- 1982.- Vol. 76.- P. 483-484.

7. Hamilton D. R., Bradley R. E. // J. med. Entomol.- 1979.- Vol. 15.- P. 305-306.

8. Klein T. A., Harrison B. A., Andre R. G. et al. // Mosquito News.- 1982.- Vol. 42.- P. 265-271.

10.Reinhardt R., Ester H. // Zool. Jahrb.- 1971.- Vol. 98.- P. 511-519. iRo80-989-991

12.Roychowdhury S. P., Kanoujia K. H., Babu C. s. et al // J. Commun. Dis.- 1979.- Vol. 11.- P. 66-70.

Смертность зараженных и незараженных комаров после контакта с инсектицидом.

Влияние контакта комаров с ДДТ на их восприимчивость к возбудителю малярии.

Для того чтобы предвидеть все эпидемиологические последствия мероприятий по борьбе с переносчиками болезней человека, необходимо учитывать не только количество насекомых, уцелевших после проведения противоэпидемических мероприятий, но и их качество - векторные способности. Дело в том, что часть особей, оставшихся в живых, получает сублетальные дозы инсектицида, которые вызывают существенные изменения в их организме (Samaranayaka-Ramasamy, 1978; Srivastava e. a.,1980, и др.). Показано (Алексеев и др., 1977; Дробозина и др., 1980, и др.), что в результате может, например, измениться агрессивность комаров. Поскольку заражаемость переносчика зависит от его физиологического состояния (Baquar e.a., 1980; Sneller e.a., 1981 и др.), от действия на него различных физических и химических факторов (Mohan, 1955; Ragab, 1949, и др.), есть все основания предполагать возможность влияния сублетальных доз инсектицидов также и на восприимчивость переносчика.

Такое влияние было показано в отношении некоторых других пар возбудитель-переносчик (Gaaboub e. a., 1975, 1976, и др.). Что же касается непосредственно возбудителей малярии, то в единственной, известной нам работе (Mohan, 1955) предполагаемый эффект влияния сублетальных доз инсектицида на восприимчивость комаров обнаружен не был. Но эта работа ограничивалась исследованием влияния контакта с инсектицидом только непосредственно перед заражающим кормлением и только лишь на экстенсивность заражения. По этой причине результаты, приведенные в ней нельзя считать окончательными.

Задача настоящей работы состояла в том, чтобы оценить возможное влияние контакта переносчика с инсектицидом на его заражаемость возбудителем малярии не только по доле зараженных особей, но также и по обилию в них возбудителя, и не только при контакте с инсектицидом непосредственно перед заражающим кормлением, но и в случае, когда контакт происходит задолго до него.

Работа выполнена на модели Plasmodium gallinaceum Brumpt.- Aedes aegypti (L.). В качестве инсектицида использован ДДТ, поскольку он в то время чаще всего применялся для уничтожения имагинальных фаз переносчиков малярии.

Каждую партию одновозрастных комаров делили на две или три группы, одна из которых служила контролем, а другую (или другие) подвергали контакту с бумагой, пропитанной 4 %-ным раствором ДДТ по методике ВОЗ. После контакта с инсектицидом все группы одной партии одновременно кормили кровью на одном и том же цыпленке, зараженном возбудителем малярии. Обилие возбудителя в крови цыплят-доноров было различным: процент пораженных эритроцитов 1-15 %, а уровень гамонтемии 0.4-3.3 %. Эти различия вызывали разную зараженность разных партий комаров, но не могли служить причиной различий между сравниваемыми группами, так как их кормили одновременно на одном и том же животном.

После кормления во всех группах выбраковывали особей, не набравших полной порции крови. Комаров содержали при 27-28^оС и 90-95 % влажности с подкормкой раствором глюкозы. Комаров из каждой группы одной партии вскрывали одновременно, как правило, в два приема: часть особей через 5-6 суток после заражения (определяли наличие и количество ооцист), а часть - через 10-12 суток (определяли наличие спорозоитов).

Опыты выполнены в двух вариантах: 1) контакт с инсектицидом проводился за сутки или 2) за час до заражающего кормления.

Объем исследований приведен вместе с результатом.

В том случае, когда контакт комаров с инсектицидом проводился за сутки до заражающего кормления, он не оказывал никакого влияния ни на долю заразившихся особей, ни на обилие возбудителя в комарах (табл. 1). Исследовано более 100 особей и, если бы влияние имелось, оно проявилось, хотя бы в виде тенденции.

В случае контакта комаров с инсектицидом за час до заражающего кормления (табл. 2) различия в доле зараженных особей между опытными (контактными) и контрольными (интактными) группами особей были невелики и статистически недостоверны (вероятность случайной разницы около 0.05). Однако знаменательна тенденция: в общем итоге среди комаров, контактировавших с инсектицидом, доля зараженных особей несколько ниже, чем среди интактных. Эта тенденция настораживает: возможно, что в случае иных сочетаний возбудителя, переносчика и инсектицида, сублетальные дозы могут существенно повлиять на восприимчивость переносчика.

Обилие возбудителя, т. е. число развивающихся ооцист в комарах в разных опытах было различным, но влияние инсектицида на этот показатель ни в одном опыте не обнаружилось.

Контакт комаров (A. aegypti) с сублетальными дозами инсектицида (ДДТ) не вызывает существенного изменения в их восприимчивости к возбудителю малярии.

1. Алексеев А. Н., Суворова Н. И. Увеличение активности нападения резистентных Anopheles maculipennis sacharovi Favre под влиянием контакта с ДДТ. // Мед. паразитол.- 1977.- вып. 4.- С. 349-444.

2. Дробозина В. П., Бондарева Н. И. Активность нападения на добычу резистентных к ДДТ Anopheles labranchiae atroparvus Thiel после контакта с этим инсектицидом. // Мед. паразитол.- 1980.- вып. 1.- С. 9-12.

3. Baqur S.,Hayes C. G., Ahmed T. The effect of larval rearing cjnditions and adult age on the susceptibility of Culex tritaeniorhynchus of infection with West Nile virus. // Mosq. News.- 1980.- Vol. 40.-P. 165-171.

4. Gaaboub I. A., Busvine J. R. DDT-resistance status and the effect of DDT exposure in relation to vectorial capacity of Aedes aegypti (L) for Brugia pahangri (Buckley and Edeson). // Ann. Trop. Med. Par.- 1975.- Vol. 69.- P. 493-501.

5. Gaaboub I. A., Busvine J. R. Effect of larval treatments with the insect development inhibitor PH-60 : 40 on the vectorial capacity of Aedes aegypti (L) for Brugia pahandi (Buckley and Edeson). // Ann. Trop. Med. Par.- 1976.- Vol. 70.- P.355-360.

6. Mohan B. H. Sporogony cycle of malaria parasets in resistant and non-resistant strain of mosquitoes after exposure to DDT. // Indian J. of Malar.- 1955.- Vol. 9.- P.287-296.

7. Ragab H. A. Effect of humidities and temperature on the size and number of oocysts of Plasmodium gallinaceum transmitted by mosquito.- Nature.- 1949.- Vol. 163.- P.643-644.

8. Samaranayaka-Ramasamy M. Insecticide-induced release of neurosecretory hormons. // Pestic. and Venom Neurotoxic. 15 Int. Congr. Entomol.,Washington, D. C., 1976.- N.Y.-London.- 1978.-P. 83-93.

9. Sneller V. P., Dadd R. H. Brugia pahangi: growth imrpovement with lecithin in the diet of axenically reared hosts, Aedes aegypti. // Exp. Parasitol.- 1981.- Vol. 51.-P. 335-340.

10.Srivastava H. C., Verma G. S. Effect of insecticides on transaminase enzymes in mosquito larvae (Culex fatigans). // Z. angew. Zool.- 1980.- Vol. 67.- P. 233-238.

Таблица 1. Зараженность комаров возбудителем малярии при наличии и отсутствии их контакта с инсектицидом за сутки до заражающего кормления.

Обозначения: Т - Продолжительность контакта с ДДТ (мин); Дп - Доля (%) погибших особей.

Таблица 2. Зараженность комаров возбудителем малярии при наличии и отсутствии их контакта с инсектицидом за час до заражающего кормления.

Обозначения: Т - Продолжительность контакта с ДДТ (мин); Дп - Доля (%) погибших особей.

Всегда ли необходимы сахара для заражения комаров плазмодиями малярии.

В соответствии с "теорией связи типов питания и пищеварения кровососущих членистоногих с их способностью быть специфическими переносчиками возбудителей трансмиссивных инфекций" одним из условий передачи гемоспорин, в частности возбудителей малярии, является наличие двойственного (кровью и сахаром) питания имаго (Алексеев, 1984, 1985). Поступление углеводов в желудок переносчика казалось необходимым именно в момент нахождения там возбудителя для обеспечения энергией микрогамет. Этот вывод основывается на следующих данных: 1) показано (Bishop, McConnachie, 1960; Lachmajer, Antonowicz, 1983; Nodler, Miller, 1984), что эксфлагелляции микрогамет гемоспорин in vitro способствует добавление в кровь сахаров; 2) установлено (Mack e. a.,1979), что возбудитель малярии в процессе развития ооцисты интенсивно поглощает сахара из гемолимфы насекомого; 3) выявлено (Weatherby, Noblet, 1973), что количество развивающихся в комаре ооцист зависит от того, какими углеводами они питались.

Однако прямых экспериментов, направленных на проверку необходимости углеводного питания для заражения переносчика возбудителем малярии, не было.

В предлагаемой работе излагаются результаты опытов, направленных на оценку возможности заражения комаров возбудителем малярии в условиях, исключающих углеводное питание переносчика.

В опытах использована лабораторная модель малярии: возбудитель - Plasmodium gallinaceum, переносчик - Aedes aegypti.

Эксперименты поставлены следующим образом. Партию куколок комаров, выращенных одновременно в одном сосуде, делили на две группы, по 100 - 150 особей в каждой. Каждую группу помещали в отдельный садок, объемом 1 дм³. В один из садков (контрольный) со дня помещения в него куколок ставился сосуд с ватным тампоном, пропитанным 10 %-ным раствором глюкозы. В дальнейшем глюкоза в этом садке находилась постоянно. В другой садок (опыт) глюкозу с самого начала не ставили. После вылета самок садки с комарами выдерживали в течение 3- 5 суток, а затем кормили на цыпленке, больном малярией. Перед кормлением у цыплят определялся уровень паразитемии в крови по шкале Немировской (Немировская, 1941; Рабинович, Мошковский, 1964). Контрольную и опытную группы комаров кормили на одном и том же цыпленке одновременно; одну - с правой, а другую - с левой стороны (стороны, на которой кормили ту или иную группу, определялись жребием). После кормления кровью из контрольного садка (с глюкозой) удаляли самок, выпивших неполную порцию крови или не пивших крови совсем. В опытной группе таких особей не было. И до, и после кормления кровью обе группы комаров содержались в одних и тех же условиях (рядом на одной полке одного термостата), при температуре 28-29^оС и относительной влажности не менее 95 %. Через 1-2 суток после кормления кровью комары опытной группы начинали получать глюкозу так же, как в контроле.

Уровень зараженности комаров оценивали дважды (обе сравниваемые группы в один и тот же день): через 6-7 суток определяли долю особей, имеющих ооцисты, и число ооцист у каждого комара; через 10-14 суток определяли долю особей, имеющих спорозоиты в слюнных железах.

По этой методике проведено 9 опытов (исключения: в опыте N 2 исследование на наличие ооцист не проводили, а в опыте N 7 не определен уровень паразитемии у цыплят-доноров). Всего исследовано на зараженность 500 особей.

С целью определения инфективности возбудителя в двух экспериментах (опыты N 1 и 2) группы комаров, не получавших предварительной углеводной подкормки, по завершении спорогонии были накормлены кровью на здоровых цыплятах. Оба цыпленка заболели: плазмодии обнаружены у обоих.

Уровень зараженности цыплят и продолжительность выдержки комаров от вылета до кровососания в каждом опыте указаны в табл. 1.

Оценка зараженности комаров в период развития в них ооцист (табл. 2) показала, что и без предварительной подкормки углеводами большое число особей (в среднем 50 %) содержат возбудителя малярии. Подопытные комары заражались и тогда, когда в контроле уровень заражения был невелик (около 10 %), и тогда, когда он был высоким (около 90 %). Наблюдается тесная корреляция (r=0.86±0.21) между зараженностью контрольных и подопытных партий. Различия между ними в отдельных экспериментах, как правило, невелики и не выходят за пределы ошибки репрезентативности. Соотношение экспериментов, давших повышенную зараженность подопытных групп (по сравнению с контролем), и экспериментов, давших понижение зараженности подопытных партий, практически равно (4 к 5). В общем итоге разница между долей зараженных особей в контроле и в опыте невелика (менее 10 %).

Аналогичную картину дает анализ интенсивности заражения комаров, определенной по числу ооцист у зараженных особей (табл. 3). Разница между контролем и опытом в отдельных экспериментах невелика и статистически недостоверна, а корреляция между ними, наоборот, достоверна (r=0.64±0.32). Среднее по всем опытам число ооцист на одну зараженную самку также практически одно и то же, как у особей, имевших предварительную подкормку углеводами, так и не имевших ее.

Тот же результат даёт и анализ зараженности комаров возбудителей малярии на стадии спорозоита (табл. 4). В отдельных экспериментах доля зараженных особей колебалась в широких пределах (от 10 до 100 %), но изменения зараженности в опыте и в контроле происходили синхронно (r=0.87±0.17), различия между сравниваемыми группами, как правило, невелики и вызваны, вероятно, ошибкой репрезентативности. В общем итоге число случаев, когда комары, получавшие глюкозу, были заражены сильнее комаров, ее не получавших, равно числу случаев, в которых наблюдается обратное. Средняя доля зараженных особей среди комаров, не получивших предварительной подкормки глюкозой, почти в точности равно доле зараженных особей среди тех, кто эту подкормку имел.

Полученные данные говорят о том, что для исследованной пары видов возбудителя и переносчика малярии предварительное (перед заражающим кормлением) получение углеводов не является условием заражения. (Мы не можем категорически утверждать, что для других сочетаний возбудителей и переносчиков малярии возможно заражение без предварительного кормления комаров сахарами. Однако, в ходе различных экспериментов по заражению Anopheles atroparvus P.vivax и An. stephensi P.berghei мы сталкивались со случаями, когда возбудитель обнаруживался у комаров, получение углеводной подкормки которыми было маловероятно.)

Такой результат имеет прямое практическое значение. Для лабораторных работ он показывает возможность отказа от предварительного кормления комаров глюкозой, что экономит материалы и время. Теоретическое значение в том, что возможность развития представителей Sporozoa в этой группе низших двукрылых обеспечивается не тем, что они потребляют углеводы. Надо искать другие механизмы.

1. "Двойственное" (кровью и сахаром) питание имаго комаров не является причиной их способности обеспечивать развитие плазмодиев.

2. В исследованной паре видов (P. gallinaceum, A. aegypti) питание комаров углеводами не сказывается ни на экстенсивности, ни на интенсивности их заражения возбудителями малярии.

Алексеев А. Н. Об особенностях развития и питания кровососущих членистоногих, обеспечивающих их становление специфическими переносчиками возбудителей болезней. // Мед. паразитол.- 1984.- N 2.- С. 34-39.

Алексеев А. Н. Теория связи типов питания и пищеварения кровососущих членистоногих с их способностью быть специфическими переносчиками возбудителей трансмиссивных инфекций. // Паразитология.- 1985.- Т. 19, вып. 1.- С. 3-7.

Немировская А. И. Закон реинокуляции при малярии. // Мед. паразитол.-1941.- Т. 10, N 3-4.- С. 324-339.

Рабинович С. А., Мошковский Ш. Д. Экспериментальное изучение противомалярийного препарата галохина (циклохин). Сообщ. 1. Сравнение гематошизотропной активности галохина и хлорохина при равных дозах. // Мед. паразитол.- 1964.- Т. 33, N 4.- С. 472-478.

Bishop A., MacConnachie E. W. Further observations on the in vitro development of the gametocytes of the Plasmodium gallenacium. // Parasitology.- 1960.- Vol. 50.- P. 431-448.

Lachmajer J., Antonowicz W. Experimental blood feeding og mosquito femals of some Anopheles, Aedes and Culex species: taking of blood meal by starving and glucose-fed insects. // Acta parasitol. pol.- 1983.- Vol. 28, N 25-37.- P. 285-304.

Mack S. R., Samuels S., Vanderberg J. P. Hemolimph of Anjpheles stephensi from noninfected and Plasmodium berghei - infected mosquitoes. 3.Carbohydrates. // J. Parasitol.- 1979.- Vol. 65, N 2.- P. 217-221.

Nodler S. A., Miller J. H. A redescription of Hematozoon mocassini (Laveran, 1902) n. comb. from Agkistropodon piscivorus leucostoma Troost, 1936. // J. Protozool.- 1984.- Vol. 31, N 2.- P. 321-324.

Weatheby A. B., Noblet R. Plasmodium gallenacium: Development in Aedes aegypti maintained on various carbogydrate diets. // Experiment. Parasitology.- 1973.- Vol. 34, N 3.- P. 426-431.

Таблица 2 Доля комаров, зараженных возбудителем малярии на стадии ооцисты

Примечание. В опыте N 2 (см. табл.1) комаров на наличие ооцист не исследовали.

Таблица 3. Интенсивность заражения комаров при наличии и отсутствии сахара.

Таблица 4. Зараженность комаров спорозоитами при наличии и отсутствии сахара.

Влияние условий развития комаров Aedes aegypti L. на их заражаемость Plasmodium gallinaceum Brumpt.

Известно, что условия развития комаров могут резко повлиять на их физиологическое состояние - плодовитость, размеры, чувствительность к инсектицидам и т. п. (3., 4., 7). Не исключено, что они могут сказаться и на их заражаемости возбудителем малярии. Ответ на этот вопрос имеет прямое эпидемиологическое значение. Под влиянием природных факторов и вмешательстве человека условия развития различных популяций и даже разных поколений одной и той же популяции существенно различаются. В зависимости от того, сказываются ли эти изменения на восприимчивости переносчиков, должны меняться соответствующие элементы тактики противомалярийных мероприятий.

Вопрос о влиянии условий развития на заражаемость переносчиков важен также и теоретическом плане: выявление факторов, влияющих (и не влияющих) на это свойство, может помочь найти механизмы, управляющие восприимчивостью.

И, наконец, влияние условий на заражаемость необходимо знать для того, чтобы с наименьшими затратами вести исследования в данной области. В настоящее время начаты эксперименты по оценке действия на восприимчивость комаров различных биологически активных веществ (1, 2, 5, 10). Но эти вещества действуют не только сами по себе - они меняют условия развития особей: выбивая часть из них, они снижают плотность популяции, повышают количество корма, приходящееся на каждую особь и т.п. Быть может, опосредованное влияние этих агентов усиливает их прямое воздействие, а может быть, наоборот, компенсирует. До получения ответа на поставленный вопрос невозможно трактовать результаты токсилогических испытаний.

Поскольку известно, что ход спорогонии и сама ее возможность зависят от условий содержания взрослых особей, большинство работ посвящено исследованию этого периода. Влиянию условий развития личинок уделено мало внимания. В опубликованных работах (11, 12) указано, что изменение температуры среды и плотности посадки личинок не отразилось на заражаемости полученных имаго. Но эти данные нельзя принять без проверки, так как они основаны на очень небольшом материале и не подтверждены из независимых источников. Между тем известно (6, 8, 9), что условия развития преимагинальных фаз существенно сказываются на заражаемости полученных особей возбудителями других болезней.

В данной работе исследовано влияние на заражаемость комаров возбудителем малярии 3 наиболее вариабельных факторов: температуры, концентрации особей и количества получаемого ими корма. Для убедительности опытов каждый фактор взят в значениях, близких к предельным.

Исследования выполнены на лабораторной модели малярии Plasmodium gallinaceum Brumpt - возбудитель, Aedes aegypti (L.) - переносчик. Для анализа действия каждого фактора по отдельности личинок сравниваемых групп выращивали в условиях, отличавшихся только по действующему фактору. Перечень этих условий приведен в табл. 1. Экспериментальные группы личинок выращивали в заданных условиях начиная с I стадии вплоть до окукливания. Во всех случаях с нормальной плотностью посадки и оптимальным количеством корма выживаемость особей была не ниже 96 %. При повышенной плотности и голодной диете около половины личинок погибало. Гибель происходила в конце развития - на III и особенно на IV стадиях.

В результате гибели оставшиеся особи развивались при более низкой плотности и при большем удельном количестве корма, чем оговорено в условиях.

Каждый опыт состоял в том, что личинок из одной партии яиц разделяли на две группы. Эти группы выращивали в условиях, влияние которых требовалось сравнить. Самок, выращенных из личинок сравниваемых групп, кормили кровью одновременно на одном и том же больном цыпленке (одну группу - с правой, другую - с левой стороны животного по жребию). После кормления из обеих групп выбраковывали особей, выпивших не полную порцию крови. И до, и после заражения комаров всех групп держали при температуре 28^оС и влажности 80-90 %. Анализ зараженности сравниваемых групп проводили в одни и те же дни - через 5 суток после заражающего кормления на наличие и обилие ооцист, через 10 суток - на наличие спорозоитов.

Результаты приведены в табл. 2. Опыты не выявили влияния температуры на число особей, заражающихся возбудителем: и по ооцистному, и по спорозоитному индексу оба варианта опыта дали очень близкие результаты. Влияние температуры проявляется лишь при сравнении обилия возбудителя в переносчике - в числе ооцист у зараженных особей. Комары, выращенные при повышенной температуре, имели в среднем в 1.5 раза меньше ооцист, чем выращенные в нормальных условиях. Аналогичная картина наблюдается при анализе влияния на заражаемость концентрации личинок и количества у них корма. На долю зараженных особей эти факторы не повлияли, а обилие возбудителя у особей, развивавшихся в условиях повышенной плотности и дефицита корма, было понижено.

Обращает на себя внимание, что во всех сериях опытов повышенное количество возбудителя обнаружено у особей, выросших в более благоприятных условиях и потому более крупных и, следовательно, принимающих больше крови и, вместе с ней, гаметоцитов возбудителя. Однако, четкой корреляции между массой особей и обилием в них возбудителя, нет. Так, во II серии, где разница в массе куколок ничтожна, разница в обилии возбудителя близка к 30% его среднего значения, а в III серии, где масса особей различается в 2 раза, эта разница не достигает и 20 %.

Несколько слов о статистической значимости полученных данных. На первый взгляд создается впечатление, что различия в обилии возбудителя в сравниваемых вариантах опытов могут объясняться ошибкой репрезентативности - ведь ошибки средних перекрывают разницу между сравниваемыми величинами. Необходимо, однако, учесть высокую степень корреляции результатов (r >0.8). Поэтому ошибки разницы сравнительно малы. Все же вероятность случайных различий в каждой отдельной серии опытов значительна - она равна 0.1 или немного меньше. Такой вероятностью пренебрегать не следует. Если же рассмотреть весь эксперимент (все 3 серии опытов) в целом, вероятность одного и того же отклонения окажется ничтожной - менее 0.001.

Таким образом, наши результаты подтверждают полученные ранее данные о том, что изменение температуры и концентрации особей в местах выплода не отражается на доле особей, способных воспринять возбудителя малярии. В дополнение к известному показано, что на этой характеристике не сказывается также изменение количества корма, получаемого личинками.

Новым является обнаружение того факта, что изменение условий развития, а именно их ухудшение (перегрев, переуплотнение, недостаток корма), приводит к снижению обилия возбудителя в переносчике.

1. Изменение условий выплода комаров (температуры, количества корма и концентрации особей) не изменяет доли особей, способных воспринять возбудителя малярии.

2. Ухудшение условий развития личинок приводит к снижению обилия возбудителя малярии в комарах.

1. Ганушкина Л. А. // Мед. паразитол.- 1987.- N 1.- С. 10-13.

2. Жарова А.Н., Расницын С.П. Сохранение возбудителя малярии в комарах, получивших сублетальные дозы инсектицида. Мед. паразитол. 1984, N 5, С. 82-84.

3. Некрасова Л. С. // Паразитология.- 1986.- N 1.- С. 23-31.

4. Расницын С.П., Войцик А.А., Евсеева В.Е. Влияние концентрации и численности личинок комаров (Diptera, Culicidae) на результаты токсикологических испытаний бактериальных инсектицидов. Мед. паразитол. 1986, N 1, С. 13-15.

5. Расницын С.П., Жарова А.Н. Влияние контакта комаров с ДДТ на их восприимчивость к возбудителю малярии. Паразитология. 1985, т. 19, N 4, С. 287-289.

6. Baqar S., Hayes C. G., Ahmed T. // Mosquito News.- 1980.- Vol. 40, N 2.- P. 165-171.

8. Gaaboub I. A., Busvine J. R. // Ann. trop. Med. Parasit.- 1976.- Vol. 70, N 3.- P. 355-360.

10.Noireau F., Karch S. // ORSTOM. Entomol. med. parasitol.- 1983.- Vol. 21.- P. 221-224.

Условия выращивания комаров в различных сериях опытов.

Зараженность комаров, выращенных в разных условиях.

Новые модели циркуляции возбудителя малярии Plasmodium gallinaceum с использованием малярийных комаров фауны СССР.

Экспериментальное изучение малярии невозможно без использования лабораторных моделей этого заболевания. Как видно из последних обзоров (Алексеев, Кондрашова, 1985; Алексеев, 1986; Расницын, 1986) и других многочисленных публикаций (Алексеев, Расницын, 1987; Захарова и др. 1988; Чернов, Чунина, 1988 и др.), в настоящее время используется модель на основе Plasmodium gallinaceum (возбудитель ) - Aedes aegypti (переносчик). Указанная модель обладает тем существенным недостатком, что применяющийся в ней переносчик не имеет никакого отношения к циркуляции возбудителей малярии человека и, как результат, получаемые данные далеки от требований эпидемиологии.

Цель предлагаемой работы - приблизить модель и, таким образом, получаемые результаты к потребностям здравоохранения нашей страны. Поставленная цель достигается тем, что в модели используются виды комаров, которые являются реальными переносчиками малярии на территории СССР. Кроме того, расширение набора переносчиков позволяет выявлять особенности взаимоотношений разных видов комаров с одним и тем же видом возбудителя.

Для достижения поставленной цели проведено исследование восприимчивости к данному виду возбудителя двух видов комаров : Anopheles sacharovi Favre, 1903 и Anopheles pulcherrimus Theobald, 1902, которые играют основную роль в действующих очагах малярии в Закавказье и Средней Азии (Артемьев, 1984). Источниками биоматериала служили созданные нами культуры этих видов комаров (Расницын,1985; Расницын и др., 1989) и штамм P. gallinaceum, полученный из лаборатории экспериментальной химиотерапии ИМПиТМ*. Оба исследованных вида комаров оказались высоко восприимчивы к данному виду возбудителя: во всех опытах по кормлению разных пулов комаров на цыплятах, больных малярией, были обнаружены зараженные особи, в большинстве опытов комары передавали возбудителя цыплятам - реципиентам. Передача подтверждена клинически, паразитологически ( в мазках крови обнаружены типичные формы паразитов) и путем ксенодиагностики (путем обнаружения паразитов в комарах, накормленных кровью на цыплятах реципиентах). Для проверки возможности поддержания штамма возбудителя осуществлено несколько циклов циркуляции возбудителя с использованием каждого из исследуемых видов комаров. Полученные данные обобщены в таблице.

Неудачные случаи передачи возбудителя от комаров цыплятам можно объяснить тем, что на цыплят нападали только незараженные особи. В этих опытах An.sacharovi были заражены на 18 % и на цыпленка напало 8 самок, а для An. pulcherrimus эти величины соответственно 22 % и 7 самок. В обоих случаях вероятность нападения только незараженных особей близка к 0.2.

Вероятность того, что факт передачи связан со случайными причинами, пренебрежимо мала р < 0.01.

Оценка каждой новой модели циркуляции возбудителя проводилась путем сравнения с моделью, основанной на использовании комаров Ae. aegypti. Для того чтобы избежать влияния посторонних факторов, заражение и анализ сравниваемых видов проводились одновременно и идентично: заражающее кормление осуществлялось на одном и том же доноре одновременно ( один садок с правой, а другой с левой стороны тела, при этом расположение садков определялось жребием); после кровососания комаров держали в одном и том же термостате (температура 28-0.5⁰С); анализ зараженности проводили в один и тот же день (спустя 5 суток после заражающего кормления определялось наличие и число ооцист, спустя 10 суток определялось наличие спорозоитов). В период спорогонии комары имели возможность питаться 5 %-ным раствором глюкозы. Крови в этот период они не получали, так как известно (Расницын, Жарова, 1984), что данный вид возбудителя способен развиваться при отсутствии повторного кровососания беспозвоночного хозяина. Комаров заражали штаммом возбудителя, который перевивался либо кровью, либо через комаров Ae. aegypti, что исключало какое-либо влияние возможной адаптации его к новым видам переносчиков. Цыплята, на которых заражали комаров, имели паразитемию 2-3 балла по шкале Немировской (Немировская, 1941; Рабинович, Мошковский, 1964). В опытах использовали только тех комаров, которые выпили полную порцию крови, что определялось по характерному расширению брюшка о отказу от дальнейшего кровососания.

Число опытов по каждому исследованному вопросу указано вместе с результатами. В каждом опыте на 1 анализ каждой группы комаров использовали от 24 до 32 особей. При заражении цыплят от комаров к ним подсаживали по 10 комаров (но кровь пили не всегда все).

Сравнение интенсивности заражения (доли зараженных особей) Ae. aegypti и An.sacharovi показано на рис. 1, А. В среднем представители нового вида хозяина заражались несколько хуже, чем представители контрольного вида (44 против 70 %). Низкая экстенсивность заражения An.sacharovi встречается чаще, чем Ae.aegypti. Так, например, у Ae. aegypti лишь в двух опытах доля зараженных особей была ниже 50 %, а у An.sacharovi таких результатов 7. Поскольку в 8 из 10 опытов экстенсивность заражения контрольного вида была выше, чем нового, можно считать, что различия между ними не случайны (р=0.05). Но самое главное, что демонстрирует приведенный рисунок, является отсутствие корреляции в зараженности сравниваемых видов (R=0.22±30).

Обратная картина (рис. 2, А) наблюдается при сравнении интенсивности заражения (обилия возбудителя в зараженных комарах). В большинстве опытов (8 из 9) интенсивность заражения An.sacharovi более высокая, чем Ae.aegypti (вероятность случайной разницы р<0.01). В среднем число ооцист у нового вида превышало этот показатель у контрольного вида более, чем в 4 раза (104±22 ооцисты на зараженную особь против 25±6). Повышенное обилие возбудителя у An.sacharovi нельзя объяснить повышенным количеством выпитой ими крови и, как следствие, повышенным числом заглоченных гаметоцитов возбудителя. An.sacharovi действительно выпивают несколько больше крови (2.8 мг), чем Ae.aegypti (2.2 мг), но эта разница не соответствует разнице в обилии возбудителя. Опять же, как при анализе экстенсивности заражения, обращает на себя внимание отсутствие корреляции в обилии ооцист у сравниваемых видов (R=0.35±0.29). Отсутствие прямой пропорциональности (корреляции) не является, конечно, доказательством отсутствия какой бы то ни было связи вообще. Наоборот, в данном случае (рис.2,А) связь прослеживается: на фоне роста обилия ооцист у Ae.aegypti этот же показатель у An.sacharovi образует одновершинную кривую с пиком в районе 30-40 ооцист у Ae.aegypti. В этом диапазоне обилие ооцист у An.sacharovi превышает 200. Весьма вероятно, что полученные данные подтверждают гипотезу Алексеева (1985) о наличии оптимальной заражающей дозы (в данном случае различной для разных видов), но точный ответ можно будет получить лишь с помощью специальных экспериментов.

Сопоставление заражаемости An. pulcherrimus и Ae.aegypti (рис.1,Б) показывает, что новый переносчик более восприимчив, чем традиционный: число случаев, когда доля зараженных особей этого вида превосходит долю зараженных особей Ae.aegypti - 9, а случаев обратного соотношения только три (вероятность случайной разницы р=0.05). В 9 опытах из 12 доля зараженных An. pulcherrimus превышала 50 %, а у Ae.aegypti таких результатов только 7. Еще резче разница в интенсивности заражения (рис. 2,Б): среднее число ооцист у An. pulcherrimus в большинстве опытов (57 %) превышало 100 и достигло 350, а у Ae.aegypti при тех же самых условиях обилие возбудителя ни разу не превысило 60 ооцист. Разница в заражаемости сравниваемых видов не может объясняться ошибкой репрезентативности: ее вероятность слишком низка (р< 0.01). Ее нельзя связать и с количеством выпиваемой крови. Наоборот, An. pulcherrimus выпивают крови меньше, чем Ae.aegypti (1.4 против 2.2мг). Своеобразие взаимоотношений сравниваемых видов переносчиков с одним и тем же видом возбудителя подчеркивается отсутствием четкой корреляции в их зараженности: по экстенсивности заражения коэффициент корреляции невелик (R=0.53±0.15), а по интенсивности и вовсе отсутствует (R=0.12±0.28).

Прямого сопоставления заражаемости новых видов мы не проводили (это не входило в задачу работы), но имеющийся материал позволяет дать ответ и на этот вопрос. Несомненно, что эти виды отличаются не только от контрольного, но и между собой. Различия заключаются в следующем: доля зараженных An. sacharovi, как правило, ниже, а An. pulcherrimus выше, чем Ae.aegypti. Поэтому следует ожидать, что и при прямом сравнении An. pulcherrimus будет заражаться чаще, чем An.sacharovi. Сопоставление обилия возбудителя у An.sacharovi и Ae.aegypti выявляет наличие нелинейной связи между этими характеристиками обоих видов; для An. pulcherrimus такая связь не прослеживается. Из этого следует, что не будет большой корреляции между новыми видами и по обилию возбудителя. На рис. 3 представлена зависимость обилия возбудителя в комарах от доли зараженных особей. Известно (Eyles,1951), что у Ae.aegypti эта связь довольно четкая и имеет нелинейный характер. У каждого из новых видов характер зависимости между сравниваемыми показателями своеобразен и они отличаются как между собой, так и от Ae.aegypti. Для An.sacharovi зависимость близка к линейной (R=0.72±0.20) и описывается уравнением Y = 12 + 2.2X, где Х - доля (в %) зараженных особей, Y - среднее число ооцист у зараженных особей. У An. pulcherrimus линейная связь между указанными показателями невелика (R=0.49±0.25).

Результаты экспериментов позволяют дать предварительную оценку сохранения возбудителя в переносчиках, которую можно оценить по изменению доли зараженных особей возбудителей на стадии ооцисты и спорозоита. Фактические данные показаны на рис. 4. У обоих видов оба показателя заражаемости хорошо коррелируют: для An.sacharovi R=0.71±0.16, для An. pulcherrimus R=0.73±0.40. Связь этих показателей описывается уравнением Z=2+0.7U (для An. sacharovi, где Z - доля (в %) особей, имеющих ооцисты, и Z = 2.5U – 181 (для An. pulcherrimus). Уравнения показывают, что к окончанию спорогонии зараженность исследованных видов резко снижается. Причина снижения может быть разной: то ли зараженные комары погибают в большем числе, чем не зараженные, то ли спорозоиты не всегда достигают слюнных желез. (Этот вопрос требует специального изучения). Но несомненно, что у сравниваемых видов эти процессы происходят с разной интенсивностью.

Установлено, что комары An.sacharovi и An. pulcherrimus способны заражаться возбудителем малярии P. gallinacium и передавать его позвоночному хозяину (цыпленку). Эти виды пригодны для лабораторного моделирования циркуляции указанного вида возбудителя. Тот факт, что оба вида комаров являются реальными переносчиками малярии на территории СССР, позволяет считать, что их использование в модели приближает получаемые результаты к реальным процессам, происходящим в очагах указанного заболевания.

Обнаружены существенные различия во взаимоотношениях разных видов комаров с одним и тем же видом возбудителя. Они заключаются в том, что An. pulcherrimus заражается чаще, чем Ae. aegypti, который в свою очередь превосходит An.sacharovi. По обилию возбудителя в зараженных особях оба новых вида переносчиков превосходят Ae. aegypti. У An.sacharovi отмечена более высокая сохраняемость возбудителя (в среднем 71 %) и степень связи между экстенсивностью и интенсивностью заражения (R=0.72), чем у An. pulcherrimus (соответственно 57 % и R=0.49).

Общая характеристика восприимчивости Anopheles sacharovi и Anopheles pulcherrimus к Plasmodium gallinaceum.

Алексеев А. Н., Кондрашова З. Н. Организм членистоногих как среда обитания возбудителей.- Свердловск: УНЦ АН СССР.-1985.- 181 С.

Алексеев А.Н., Расницын С.П. Всегда ли необходимы сахара для заражения комаров плазмодиями малярии. Паразитология. 1987, т. 21, N 2, С. 97-100.

Артемьев М. М. Комары Anjpheles - переносчики малярии в СССР. // Борьба с малярией экологически безопасными методами. Ч. 2. - М.: Центр международных проектов ГКНТ.- 1984.- С. 44-60.

Захарова Н. Ф., Ганушкина Л. А., Чернов Ю. В. и др. Восприимчивость к малярийным плазмодиям комаров Aedes aegypti L., пораженных энтомопатогенным вирусом. // Мед. паразитол.- 1988.- N 6.- С. 18-22.

Немировская А. И. Закон реинокуляции при малярии. // Мед. паразитол.- 1941.- N 3-4.- С. 324-339.

Рабинович С, А. Мошковский Ш. Д. Экспериментальное изучение противомалярийного препарата галохина (циклохин). Сообщ.1. Сравнение гематошизотропной активности галохина и хлорина при равных дозах. // Мед. паразитол.- 1964.- N 4.- С. 472-478.

Расницын С.П. Массовое культивирование Anopheles sacharovi Favre. Мед. паразитол. 1985, N 6, С. 54-56.

Расницын С.П. Влияние возбудителей малярии на векторные способности Anopheles. "Малярийные паразиты млекопитающих". Паразитология, вып 11, Л. "Наука". 1986, С. 162-167.

Расницын С.П., Званцов А.Б., Войцик А.А., Ясюкевич В.В. Создание лабораторной колонии комаров Anopheles pulcherrimus. Мед. паразитол. 1989, N 3, С. 88.

Чернов Ю. В., Чунина Л. М. Начальные стадии постспорозоитного развития малярийного паразита в комаре. // Мед. паразитол.- 1988.- N 4.- С.7-10.

Eyles E. Studies on Plasmodium gallinaseum. 1. Characteristics of infection in the mosquito Aedes aegypti. // Am. J. Hyg.- 1951.- Vol. 54, N 1.- P. 101-112.

Особенности восприимчивости Aedes togoi к Plasmodium gallinaceum.

Поиск средств и способов борьбы с малярией путем исследования лабораторных моделей этой болезни ведется в широких масштабах. Но небольшой набор используемых моделей ограничивает возможности изучения взаимоотношений возбудителей и переносчиков - не позволяет выявить, какие закономерности являются общими, а какие отражают лишь свойства определенной пары видов возбудитель - переносчик.

Задача настоящей работы заключалась в расширении набора лабораторных моделей малярии, в частности моделей, основанных на использовании P. gallinaceum. Хотя известно, что этот возбудитель способен развиваться во многих видах комаров (3, 11, 16), в работе с ним применяют только один вид - Ae. aegypti. Особенности восприимчивости других видов не исследованы и потому, вероятно, модели с их применением не используются.

Предлагаемая работа посвящена оценке возможности применения в качестве переносчика P. gallinaceum комаров Ae. togoi. Выбор пал именно на этот вид , так как разработаны методы его культивирования (1, 7, 17, 18) и показана принципиальная возможность заражения указанным видом плазмодия (13).

Материалы и методы. Работа проводилась с отводком линии Ae. togoi, созданной Н. А. Тамариной и ее коллегами (1), способ поддержания нашей колонии несколько отличался от метода Н. А. Тамариной и описан ранее (8). Заражаемость Ae. togoi сравнивали с заражаемостью Ae. aegypti, штамм которого поддерживается в институте по меньшей мере 30 лет.

Метод: Партию совместно выращенных Ae. togoi делили на 2 группы: контрольную и экспериментальную, различия между которыми заключались лишь в том, что контрольных особей кормили на здоровом цыпленке, а экспериментальных - на зараженном P. gallinaceum (оба кормления проводили одновременно). Параллельно с кормлением экспериментальной группы Ae. togoi на том же цыпленке (на другом его бочке) кормили группу Ae. aegypti того же возраста, что и Ae. togoi. И до, и после кормления кровью всех комаров держали в одних и тех же условиях (в одном термостате) в темноте при температуре 28±0.5^оС и влажности 80-90 %. После кормления кровью комары имели постоянно возможность питаться раствором глюкозы, но крови больше не получали, так как известно, что возбудитель успешно развивается и без повторного кровососания (4).

Сразу же после кровососания из контрольной и опытной групп Ae. togoi отбирали по 50 комаров, которых содержали в отдельном садке. В этих подгруппах определяли выживаемость путем ежедневного подсчета погибших особей. Оставшуюся подгруппу экспериментальных особей использовали для оценки зараженности путем определения наличия и числа ооцист (через 5 суток после кровососания) и наличия спорозоитов (через 10 суток после кровососания). В тот же день, когда оценивали зараженность Ae. togoi, оценивали зараженность Ae. aegypti параллельной группы.

Объем исследованного материала: проведено 15 опытов. В каждом опыте заражаемость комаров на каждой стадии развития возбудителя оценивали путем анализа 20-30 особей (всего исследовано 690 особей Ae. togoi и 813 особей Ae. aegypti), для оценки выживаемости использовали по 50 комаров опытной (заражавшейся) и контрольной (не заражавшейся) групп (всего 1500 особей).

Известно (9, 10, 12, 14, 15), что у переносчиков одного вида могут существовать как высоко восприимчивые, так и рефрактерные популяции по отношению к одному и тому же виду возбудителя. Поэтому первой задачей было определение восприимчивости к P. gallinaceum имевшейся в нашем распоряжении линии Ae. togoi.

В таблице приведены данные, характеризующие заражаемость Ae. togoi в сравнении с Ae. aegypti. Они показывают, что исследуемая линия комаров высоко восприимчива к возбудителю - во всех 15 опытах обнаруживались зараженные особи. Возбудитель хорошо развивается в комарах - все 6 попыток передать его через комаров позвоночному хозяину окончились успешно. Из таблицы видно, что комары Ae. togoi заражаются чаще, чем Ae. aegypti, а обилие ооцист у них выше. Более высокая доля и более высокая интенсивность заражения Ae. togoi наблюдались во всех 15 опытах. Вероятность того, что эти различия случайны, очень мала (p=0.000003).

Так же как в отношении Ae. aegypti (6), возбудитель не оказывал влияния на выживаемость зараженных Ae. togoi. Фактические данные показаны на рис. 1 (каждая кривая суммирует результаты всех опытов). В обеих сравниваемых группах в первые 2 суток комары почти не гибли. В дальнейшем отмирание происходило одинаково, причем у интактных комаров средняя суточная выживаемость (94 %) была даже чуть ниже, чем у зараженных (95 %).

У Ae. togoi, так же как у Ae. aegypti (2, 5), наблюдается высокая степень корреляции (R=0,95-0.03) между зараженностью особей возбудителем на стадии ооцисты и на стадии спорозоита (рис. 2). В исследованном диапазоне от 40 до 100 % характер зависимости описывается уравнением: y=1.2x - 25.2, где y - доля особей, зараженных возбудителем на стадии спорозоитов, x - то же на стадии ооцисты. На рисунке и в математическом описании зависимости видно, что доля особей со спорозоитами, как правило, ниже, чем доля особей с ооцистами. Абсолютная разница в среднем равна 8 % и не зависит от доли зараженных особей. Это значит, что потеря возбудителя в группах с низкой долей зараженных особей и низкой интенсивностью заражения происходит относительно чаще, чем в группах, где зараженных много и интенсивность заражения велика.

У Ae. togoi не обнаруживается прямолинейной связи между долей зараженных особей и интенсивностью заражения (измеряемой числом ооцист). Коэффициент корреляции всего лишь 0.57-0.17. Как видно на рис. 3, прямолинейная связь имеется лишь при зараженности в диапазоне от 40 до 80 % (R=0.86-0.26), но при высокой доле зараженных особей прямолинейный характер зависимости нарушается из-за большого числа групп с очень высоким обилием ооцист.

У Ae. aegypti связь между долей зараженных и обилием возбудителя ближе к прямолинейной (R=0.76-0.18), вероятно потому, что не было случаев с заражаемостью близкой к 100 % (максимум 88 %).

Полученные данные позволяют сравнить изучавшиеся виды по доле зараженных комаров (рис. 4) и интенсивности заражения (рис. 5) в партиях кормившихся одновременно на одном и том же цыпленке, т. е. получавших возбудителя в одном и том же состоянии. Как ни странно, достоверная связь не проявилась ни по одному из этих показателей: по доле зараженных корреляция невелика (R=0.39-0.22), а по обилию ооцист и вовсе отсутствует (R= - 0.11-0.26).Полученные данные показывают, что изученная линия Ae. togoi высоко восприимчива к имеющемуся штамму P. gallinaceum. У большинства особей спорогония проходит успешно (спорозоиты достигают слюнных желез) и комары способны эффективно передавать возбудителя. P. gallinaceum не оказывает угнетающего влияния на выживаемость переносчика. В этом отношении был исследован весь критический период, включающий прохождение оокинет через стенку желудка, количественный рост возбудителя, происходящий в период развития ооцист (когда поглощения питательных веществ должно идти наиболее интенсивно) и в период вскрытия ооцист (когда спорозоиты выходят в гемоцель переносчика). Если в этот период комары не пострадали, ожидать их повышенной гибели впоследствии не приходится.

Специального обсуждения заслуживает отсутствие сходства в заражаемости разных видов переносчиков. Первым объяснением повышенной заражаемости Ae. togoi кажется более крупный размер комаров этого вида и, как следствие, большее количество крови, которое они выпивают. Действительно, специальные измерения показали, что в наших опытах особи этого вида выпивали примерно вдвое больше крови (4.6-0.3 мг), чем Ae. aegypti (2.2-0.2 мг). Вряд ли это объяснение удовлетворительно, так как, во-первых, уровень заражения Ae. togoi превосходил уровень заражения Ae. aegypti не вдвое, а в десятки и даже сотни раз (см. рис.4 и 5), а во-вторых, и это самое главное, отсутствовала корреляция в зараженности сравниваемых видов. Это значит, что зараженность определяется каким-то другим фактором (или факторами), выявление которого может помочь раскрытию механизма адаптации возбудителя малярии к определенным видам переносчиков.

1. Комары исследованной линии Ae. togoi хорошо заражаются P. gallinaceum и способны успешно передавать возбудителя позвоночному хозяину.

2. Возбудитель малярии P. gallinaceum не влияет на выживаемость переносчика Ae. togoi.

3. Восприимчивость Ae. togoi (по доле зараженных особей и обилию возбудителя) значительно превосходит восприимчивость исследованной линии Ae. aegypti.

4. Заражаемость Ae. togoi не коррелирует с заражаемостью исследованной линии Ae. aegypti ни по доле зараженных особей, ни по обилию ооцист.

Примечание. Специальных опытов по передаче возбудителя через Ae. aegypti мы не ставили, так как эта способность хорошо известна. В частности, имеющийся штамм P. gallinaceum поддерживается с использованием перевивки через комаров этого вида. За последние 2 года такая перевивка успешно осуществлялась не менее 100 раз.

1. Александрова К. В., Тамарина Н. А., Резник Е. П. Опыт лабораторного культивирования комара Aedes togoi (Diptera, Culicidae) // Паразитология.- 1978.- Т. 12, N 2.- С. 167-170.

2. Алексеев А.Н., Расницын С.П. Всегда ли необходимы сахара для заражения комаров плазмодиями малярии. Паразитология. 1987, т. 21, N 2, С. 97-100.

3. Демина Н. А., Левитанская П. Б., Авраменко В. А. //Мед. паразитол.- 1951.- N 5.- С. 472-473.

4. Расницын С.П., Жарова А.Н. Отсутствие влияния повторного кровососания комаров на их зараженность возбудителем малярии. Паразитология. 1984, т. 18, N 2, С. 179-181.

6. Расницын С.П. Влияние возбудителей малярии на векторные способности Anopheles. "Малярийные паразиты млекопитающих". Паразитология, вып 11, Л. "Наука". 1986, С. 162-167.

8. Ясюкевич В.В., Расницын С.П., Званцов А.Б. Связь между количеством крови, которое выпивают комары, и их заражаемостью возбудителем малярии. Паразитология. 1990, т. 24, N 6, С. 474-479.

9. Beaty B. J., Aitken T. H. J. // Mosquito News.- 1979.- Vol. 39, N 2.- P. 232-238.

10.Buxton B. A., Mullen G. R. // J. med. Entomol.- 1981.- Vol. 18, N 5.- P. 434-440.

12. Duhrkopf R. E., Trpis M. // Amer. J. trop. Med.- 1980.- Vol. 29, N 5.- Pt 1.- P. 815-819.

14.Jones R. H., Foster N.M. // Amer. J. trop. Med.- 1978.- Vol. 27, N 1.- Pt 1.- P. 178-183.

15.Jones R.H., Luedke A.J., Walton T. E., Metcalf H.e. // Rev. mond Zootechn.- 1981.- N 38.- P. 2-8.

16.Russel P. F., Mohan B. N. // J. Parasitol.- 1942.- Vol. 28, N 2.- P. 127-129.

17.Trimble R.M., Wellington W. G. // Mosquito News.- 1979.- Vol. 39, N 1.- P. 18-20.

18.Wearthersby A. B. Colonization of six species of mosquito in Japan // Mosquito News. (проверить)- 1962.- Vol. 22, N 1.- P. 31-34.

Влияние состояния репродуктивной системы самок комаров на их заражаемость возбудителем малярии.

На модели An. sacharovi - Pl. gallinaceum обнаружено, что развитие яичников переносчика стимулирует восприимчивость его к возбудителю. При торможении развития фолликулов комары почти не заражаются. Подтверждена способность комаров заражаться возбудителем малярии без предварительного питания углеводами. Выявлено влияние возраста комаров и количества поглощаемой ими крови на развитие яиц и заражаемость возбудителем.

Для теории и практики медицинской энтомологии важно знать причины, определяющие возможность заражения переносчика возбудителем. Среди многочисленных факторов, управляющих этим явлением, наименее известны те, которые связанны с состоянием макроорганизма. Единственное, что неоднократно указывалось, это зависимость заражаемости от возраста членистоногого и связанных с ним изменений в перитрофической мембране (Distelmans e.a., 1982; Terzian e. a., 1956). Несколько лет тому назад мы неожиданно столкнулись с ещё одним фактором, влияющим на заражаемость, - состоянием репродуктивной системы. В предлагаемой статье приводятся факты, подтверждающие это явление.

После обнаружения возможности развития Plasmodium gallinaceum Brumpt в комарах Anopheles sacharovi Favre (Расницын и др., 1991) мы решили посмотреть, как влияет микроорганизм на плодовитость хозяина в данной паразитарной паре.

По требованию рецензента разъясняем. Выбор для исследования данной модели основывается на том, что An. sacharovi - реальный переносчик малярии человека, тогда как Ae. aegypti таковым не является, поэтому использованная модель ближе к реальному эпидемическому процессу. Что же касается "естественности" связи возбудителя и переносчика (взаимодействия сочленов паразитарной пары в природе), то в обоих случаях ее нет. Ae. aegypti, также как и An. sacharovi, в природе данный вид плазмодия не переносит (Garnham, 1966).

Предполагалось, что паразит либо вызовет снижение плодовитости, либо не повлияет на этот показатель, как это наблюдалось в случае с Aedes aegypti (Жарова и др., 1984; Freier, Friedman, 1976; Hucker, 1971; Hucker, Kilama, 1974). Однако обнаружилось, что среди заражённых комаров случаи полного отсутствия развитых яиц встречаются реже, чем среди незаражённых особей. При обратном рассмотрении выяснилось, что особи, не развившие яйца, возбудителем малярии почти не заражаются.

Для проверки этой закономерности проведены специальные опыты. Затем исследованы молодые комары, которые, как известно (правда, для других видов), редко развивают яйца после первого кровососания (Детинова, 1962; Mutero, Birley, 1989), и комары, принявшие не полную порцию крови, т.к. считается, что у них яйца не развиваются (Виноградская, 1974; Детинова, 1962).

В опытах использована колония An. sacharovi, описание которой опубликовано (Расницын, 1975) и штамм Pl. gallinaceum, полученный из лаборатории С.А.Рабинович в 1986 г. (Пользуемся случаем поблагодарить сотрудников лаборатории за предоставление штамма и обучение методам работы с ним.) Мы поддерживаем штамм, главным образом, путём перевивки через комаров Ae. aegypti, реже - кровью. В опыты брали только неоплодотворённых самок, которых отделяли от самцов на фазе куколки. Таким образом достигалась однородность материала по данному показателю. И, что самое главное, у неосеменённых самок задерживается откладка яиц (Расницын и др., 1984; Bentley, Day, 1989), благодаря чему при вскрытии можно определить, развивались ли яйца у каждой конкретной особи. Там, где это специально не оговорено, в опыт брали "старых" самок, в возрасте 3-5 суток. "Старые" особи до заражающего кормления имели возможность питаться 5%-ным раствором глюкозы, но за 4-6 ч. до кровососания глюкозу из садков вынимали. Молодые комары до заражающего кормления углеводной подкормки не получали.

По требованию рецензента разъясняем. Под "возрастом" понимается число дней, прошедших от вылета особи из куколки до кормления кровью, а не "физиологический возраст", который у комаров определяется числом гонотрофических циклов. В данном тексте "старыми" именуются особи, прожившие больше дней, чем те, которые именуются "молодыми", а не "физиологически старые".

Заражение комаров проводилось кормлением их на цыплятах спустя 7-9 суток после заражения цыплят возбудителем от комаров Ae. aegypti, когда паразитемия у них достигала 2-3 баллов по шкале А.И.Немировской (1941). Больше комары крови не получали.

По требованию рецензента поясняем, что комары, получившие кровь однократно, по определению находились на первом гонотрофическом цикле.

Все особи одного опыта кормились на одном цыплёнке одновременно. Это обеспечивало нивелировку влияния донора. Контроль полноты кровососания осуществлялся по характеру растяжения брюшка комаров и отказу от нападения на добычу. Комары с неполной порцией крови получены путём снятия их с донора в момент кровососания. Взвешивание показало, они успевали набрать от 40 до 60% от того количества, которые набирали комары той же партии, насытившиеся до отказа. Опыты с молодыми и недокормленными особями сопровождались контролем - кормлением на том же доноре старых самок полной порцией крови.

Зараженность комаров и развитие у них яиц определялось через 4 суток после кормления кровью. Зараженность оценивалась ооцистным индексом (доля особей, имеющих ооцисты возбудителя) и интенсивностью заражения (среднее число ооцист у зараженных комаров).

По требованию рецензента разъясняем, что это означает число ооцист, приходящихся в среднем на 1 зараженного комара.

Состояние яичников оценивалось по шкале Кристоферса-Мера. К моменту вскрытия либо подавляющее большинство фолликулов (не менее 80%) достигает 5 стадии - таких особей мы в дальнейшем называем "с развитыми яйцами", либо не продвигается далее 2 стадии - "без развитых яиц". Особи с промежуточным состоянием яичников не встречались.

Объем исследованного материала приведен вместе с результатами.

Первая серия экспериментов подтвердила первоначальные наблюдения о связи между развитием яичников и заражением комаров возбудителем малярии. Все 11 опытов (табл. 1) дали идентичные результаты: самки с неразвитыми яйцами заражаются крайне редко (максимум 8, в среднем 2%) и интенсивность заражения их много ниже, чем особей с развитыми яйцами. Статистическая достоверность разницы обоих показателей у сравниваемых групп не вызывает сомнений - вероятность того, что она вызвана ошибкой репрезентативности, менее 0.001.

Опыты с молодыми самками (табл. 2) показали, что и у них заражение плазмодиями происходит, как правило, лишь в случае развития яиц. Различия достоверны и для каждого отдельного эксперимента, и для всей серии в целом. Кстати сказать, контроль к этим опытам ("старые" особи) подтвердил закономерность, полученную в первой серии.

По требованию рецензента разъясняем. В данной таблице и во всех других число обнаруженных особей определенного состояния (с развитыми яйцами или без них) не обязательно совпадает с числом особей соответствующего состояния, исследованных на зараженность. Дело в том, что когда таких особей было более 30-40, исследовали не всех, а репрезентативную выборку, объемом 20-30 особей (или чуть больше). Увеличивать выборку сверх этого количества не имеет смысла т.к. при выборке, объемом более 30, прирост точности пропорционален корню квадратному из числа исследованных особей. Поэтому дальнейший прирост объема дает небольшой прирост точности, а трудозатраты сильно возрастают (ведь подсчет ооцист - дело очень трудоемкое). Например, если вместо 30 исследовать 45 особей трудозатраты возрастут в полтора раза, а относительная ошибка уменьшится всего на 22%.

Данные третьей серии (табл. 3) выявили, что недокормленные комары способны развивать яйца и заражаться возбудителем малярии. Как и в предыдущих сериях, и в этом случае зараженность тесно связана с развитием яиц. Среди особей без развитых яиц возбудитель обнаружен лишь в одном комаре из 247 исследованных, а обилие возбудителя в нем было резко снижено (15 ооцист против 99 в среднем у особей с яйцами). Контроль этой серии (комары, получившие полную порцию крови) дал закономерную связь заражаемости с развитием яиц - еще одно подтверждение первой серии.

В настоящее время нет однозначного объяснения выявленной закономерности. Едва ли здесь имеет место функциональная зависимость. Скорее всего, на возможность развития возбудителя влияют гонадотропные гормоны (Rozeboom, 1961). Это предположение подлежит экспериментальной проверке. Но сам феномен не вызывает сомнений. Он подтвердился во всех без исключения 43 опытах, в которых исследовано почти 2000 комаров. Вероятность того, что это случайность, пренебрежимо мала (много менее, чем 1 на триллион).

Наряду с основным результатом, полученные данные дают интересные сведения и по другим аспектам биологии исследованного вида и взаимоотношении его с возбудителем малярии. Важнейшие из них:

Во-первых, наши данные подтверждают опубликованные ранее наблюдения над Ae. aegypti (Алексеев, Расницын, 1987), что для заражения возбудителем малярии комары не обязательно должны получать углеводы. Как указано в методике, в данном случае (поскольку цель работы была иной) сравниваются не совсем адекватные пары: не получали углеводной подкормки молодые комары, а имели ее старые. Но все же, особи, не получавшие углеводов, заражались (в тех случаях, когда у них развивались яйца) не хуже тех, которые такую подкормку имели.

По требованию рецензента разъясним подробнее. Если сравнивать особей без учета развития яиц, комары, не получавшие сахара (молодые), кажутся менее зараженными. Но, как подробнее рассмотрено ниже, эта разница связана не с углеводной подкормкой (или возрастными особенностями), а с развитием яичников. Следовательно, без учета этого фактора анализировать материал нельзя. При одинаковом же развитии яичников и те, и другие особи заражаются практически одинаково (табл. 4). По итоговым данным максимальная разница в ооцистном индексе всего 13%, а среднее число ооцист различается максимум на 6 штук (и это при средних, превосходящих 100). Не случайно, что исследование более 400 особей не выявило статистически достоверной разницы. Конечно, можно думать, что молодость комаров компенсировала отсутствие сахаров. Но, так или иначе, остается несомненным, что лишение комаров углеводной подкормки не заблокировало их заражения плазмодиями.

Во-вторых, наши данные не совпадают с опубликованными ранее сведениями о том, что старые комары заражаются хуже молодых (Terzian, 1956). В исследованном диапазоне An. sacharovi заражается независимо от возраста (если сравнить особей с развитыми яйцами), а если рассматривать всех особей, то заражаемость "старых" (за счет более высокой доли тех, у которых яйца развились) будет более высокой. По опытам второй серии средняя зараженность "старых" самок составила 65, а молодых - 25%, эти различия статистически достоверны (вероятность ошибки репрезентативности меньше 0.005).

По требованию рецензента разъясняем подробнее. Сравним заражаемость особей разного возраста, независимо от того, развились ли у них яйца или нет (именно так делали все, перечисленные выше предыдущие исследователи, и, потому, для сопоставимости должны делать и мы). Судя по данным, представленным в табл. 5, "молодые" менее восприимчивы, чем "старые": ооцистный индекс у них много (в 2.6 раза) ниже и эта разница достоверна (p<0.01). Что же обеспечивает повышенную зараженность "старых"? Судя по всему то, что среди них больше особей способно развивать яйца после первого кровососания (92 против 40% у молодых), а, как показано выше, заражаемость тесно коррелирует с развитием яичников. Если же сравнить особей с одинаковым развитием яичников (таб. 4), разница исчезнет.

В-третьих, выяснилось, что комары исследованного вида способны заражаться и в случае принятия не полной порции крови. Эпидемиологическая значимость этого явления рассмотрена нами ранее (Ясюкевич и др., 1990). При принятии половинной порции крови доля зараженных (среди особей с яйцами) в среднем такая же, как в случае полного кровососания (61 против 65%), а обилие возбудителя в полтора раза ниже (99 против 151). Следует подчеркнуть, что и в опытах с Ae. aegypti (Ясюкевич и др., 1990) комары, получившие половинную порцию крови, заражались ненамного хуже, чем особи с полной порцией. Здесь же уместно объяснить, почему в некоторых опытах соотношение зараженности особей с полной и не полной порцией крови отклонялось от среднего и даже было обратным ему. Дело в том, что в этих опытах было очень мало зараженных особей с неполной порцией крови (2-4, максимум 14 экз.). При большом индивидуальном разбросе заражаемости, нарушение общей закономерности - результат ошибки репрезентативности. Поэтому различия между сравниваемыми группами в этих опытах статистически недостоверны (p>0.1).

Пользуемся случаем отметить, что новые данные заставляют дополнить высказанное нами ранее объяснение влияния неполноты кровососания на заражаемость (Ясюкевич и др., 1990). Нельзя исключить, что и в том случае играла роль не только возможность проникновения оокинет через стенку желудка, но и изменение количества гонадотропных гормонов.

По требованию рецензента разъясняем подробнее. Если рассматривать зараженность комаров без учета развития яиц, то, как видно из табл. 6, и в каждом отдельном опыте, и во всей серии в целом, доля зараженных особей среди недокормленных значительно ниже, чем среди напитавшихся "до отказа". Эта разница существенна (по суммарным данным более чем в 4 раза) и статистически достоверна (вероятность случайности p<0.01). Если же сравнивать зараженность комаров с учетом развития яиц (табл. 3), то разницы между накормленными полностью и не полностью обнаружится лишь в интенсивности заражения особей, развивших яйца: комары, принявшие не полную порцию крови, имели в среднем в 1.5 раза меньше ооцист, чем накормленные "до отвала". Ооцистные индексы сравниваемых групп близки (по итоговым данным максимальная разница всего 4%), и нельзя исключить что различия между ними (несмотря на большое, более 300, число исследованных особей) случайны (p>0.1). Интенсивность заражения особей с неразвитыми яйцами вообще совпала. Все это значит, что на заражение влияет не столько полнота кровососания как таковая, а то, насколько она обеспечивает развитие яиц.

В-четвертых, у An. sacharovi обнаружена способность развивать яйца при не полной порции крови - явление, несвойственное большинству видов малярийных комаров (Виноградская, 1974; Детинова, 1962). В среднем 21% особей, получивших половинную порцию крови, развил яйца.

И, наконец, выявлено, что значительная часть (в среднем 40%) самок An. sacharovi в возрасте до двух суток могут развивать яйца после первого кровососания, а, значит, заражаться возбудителем малярии. Более старые особи в подавляющем большинстве (92%) развивают яйца после первого кровососания, что способствует эффективному восприятию ими возбудителя малярии.

По требованию рецензента повторяем общеизвестное положение: результаты, полученные на одной модели, не следует без проверки переносить на другие модели и, тем более, на природные процессы.

1. В исследованной паре возбудитель-переносчик обнаружено, что комары, не развивающие яйца после кровососания, почти не заражаются возбудителем малярии.

2. Подтверждена способность комаров заражаться возбудителем малярии без предварительного питания углеводами.

3. Комары An. sacharovi в возрасте 2-5 суток способны заражаться возбудителем малярии чаще, чем более молодые.

4. Существенная доля особей An. sacharovi способна развивать яйца и заражаться плазмодиями даже при неполном насыщении кровью.

5. Комары An. sacharovi в возрасте более 2 суток, как правило, развивают яйца после первого кровососания. Около половины молодых особей также способны развивать яйца после первого кровососания.

Алексеев А.Н. Расницын С.П. Всегда ли необходимы сахара для заражения комаров плазмодиями малярии? //Паразитология. 1987. Т. 21, вып. 2. С. 97-100.

Виноградская О.Н. Взрослые комары //Руковод. по мед. энтомол. М.: Медицина, 1974. С. 59-79.

Детинова Т.С. Методы установления возрастного состава двукрылых насекомых, имеющих медицинское значение //Женева: ВОЗ, 1962. 220 с.

Жарова А.Н. Расницын С.П. Дашкова Н.Г. Плодовитость комаров Aedes aegypti в связи с их зараженностью возбудителем малярии Plasmodium gallinaceum //Паразитология. 1984. Т. 18, вып. 6. С. 469-472.

Немировская А.И. Закон реинокуляции при малярии. //Мед. паразитол. 1941. Вып. 3-4. С. 324-339.

Расницын С.П. Массовое культивирование Anopheles sacharovi Favre //Мед. паразитол. 1985. Вып. 6. С. 54-56.

Расницын С.П. Захарова Н.Ф. Демина В.Г. Изменение осемененности самок Anopheles sacharovi Favre в зависимости от условий содержания //Мед. паразитол. 1984. Вып. 1. С. 6-10.

Расницын С.П. Званцов А.Б. Ясюкевич В.В. Новые модели циркуляции возбудителя малярии Plasmodium gallinaceum с использованием малярийных комаров фауны СССР //Паразитология. 1991. Т. 25, вып. 3. С. 196-202.

Ясюкевич В.В. Расницын С.П. Званцов А.Б. Связь между количеством крови, которое выпивают комары, и их заражаемостью возбудителем малярии //Паразитология. 1990. Т. 24, вып. 6. С. 474-479.

Bentley M.O., Day J.F. Chemical ecology and behavioral aspects of mosquito oviposition //Annu. Rev. Entomol. 1989, Vol. 34. P. 401-402.

Distelmans W., Haeselleer F.D., Kaufman L., Rousseeuw P. The susceptibility of Glossina palpalis palpaslis at different aqes in infection with Trypanosoma congolense //Ann. Soc. Belge med. trop. 1982. Vol. 62, N 1. P. 41-47.

Freier J.E., Friedman S. Effect of host infection with Plasmodium gallinaceum on the reproductive capacity of Aedes aegypti //J. Invert. Pathol. 1976. Vol. 28. N 2. P. 161-166.

Hucker C.S. Kilama W.L. The relationship between Plasmodium gallinaceum density and the fecundity of Aedes aegypti //J. Invert. Pathol. 1974. Vol. 23. N 1. P. 101-105.

Hucker C.S. Differential effect of Plasmodium gallinaceum on the fecundity of several strans of Aedes aegypti //J. invert. Pathol. 1971. Vol. 18. P. 373-377.

Mutero L.M., Birley M.N. The effect of pre-gravid development in the estimanion of mosquito survival rates //J. Appl. Entomol. 1989. Vol. 107. N 1. P. 96-101.

Rozeboom L.E. The effect of the gonadotropic hormone cycle of the adult mosquito on development of the malaria parasite //J. Parasitol. 1961. Vol. 47. N 4. P. 597-599.

Terzian L.A., Stachler N., Irreverre F. The effects of ageing in the modification of these effects on the immunity of mosquitoes to malarial infection //J. Immunol. 1956. Vol. 76. P. 308-313.

Таблица 1. Сравнение заражаемости An. sacharovi, развивших

и не развивших яйца при полном насыщении кровью.

Таблица 2. Связь развития яиц и заражаемость молодых An. sacharovi при полном насыщении кровью.

Примечание: "молодые" (М) комары сахар не получали, "старые" (С) получали.

Таблица 3. Развитие яиц и заражаемость An. sacharovi при полном и не полном насыщении кровью.

Обозначения. Н - комары с неполной (около 50%) порцией крови; П - комары с полной порцией крови.

Таблица 4. Сопоставление зараженности An. sacharovi при наличии и отсутствии углеводной подкормки (при полном насыщении кровью).

Примечание. Данная таблица является модификацией табл. 2, где приведен объем исследованного материала.

Обозначения. -У - особи (молодые), не получавшие углеводной подкормки; +У - особи (старые), получавшие углеводную подкормку.

Таблица 5. Суммарная (без учета развития яйц) зараженность An. sacharovi разного возраста при полном насыщении кровью.

Примечание. Данная таблица является модификацией табл. 2, где указан объем исследованного материала и обозначения.

Таблица 6. Суммарная (без учета развития яйц) зараженность An. sacharovi, принявших разную порцию крови.

Примечание. Данная таблица является модификацией табл. 3, где приведен объем исследованного материала и обозначения.

Мы никак не можем прислать статью в исправленном виде к 20 мая т.к. она была отправлена (судя по штемпелю "Ленинград В-34") только 22 мая и добралась до нас еще через 10 дней.

Позвольте через Вас поблагодарить рецензента за подробный и доброжелательный анализ работы.

Что же касается его возражений, они, судя по всему, вызваны тем, что рецензент рассчитывает на совершенно неподготовленного читателя. Надеемся, что Вы убедитесь в этом, когда ознакомитесь с ответом рецензенту. Вот лишь несколько примеров:

Если мы пишем "возраст" и измеряем его днями, зачем объяснять, как требует рецензент, что это не то, что имеется в виду под термином "физиологический возраст"?

Если написано, что комаров кровью кормили только один раз и "Больше комары крови не получали" (стр. 3), зачем объяснять, что они находились на первом гонотрофическом цикле?

То, что "старыми" мы для сокращения называем особей в возрасте 3-5 суток, в тексте объяснено (стр. 2). Зачем, указывая "среднее число ооцист", добавлять, как рекомендует рецензент, "у 1 экз." Ведь сам рецензент все это понял, зачем же думать, что читатель не разберется!

Зачем еще раз писать о правомочности использования принятой модели? Ее преимущества объяснены в опубликованной статье, на которую мы ссылаемся (стр. 1); а то, что это наша же работа, только хорошо - это наши объяснения; но, впрочем, сослаться больше не на кого (никто другой на этой модели до сих пор еще не работал). И, наконец, возьмите многочисленные работы отечественных (например, проф. А.Н. Алексеев, Ю.В. Чернов, Л.А. Ганушкина и др.) и зарубежных исследователей. Часто ли Вы найдете обоснование выбора модели? Почему это вдруг стало необходимо?

Расхождение в числе особей, исследованных по разным характеристикам, на которые обращает внимание рецензент, - явление нормальное. (Почему оно должно быть одинаковым?). Для того, чтобы у читателя не было сомнений, в таблицах приведены соответствующие данные. Зачем еще разъяснения?

Рецензент сомневается, можно ли говорить о влиянии полноты кровососания на заражаемость. Но в табл. 3 ясно показано, что у особей, принявших неполную порцию крови, яйца развиваются гораздо реже и, соответственно, у них реже образуются ооцисты возбудителя. В исправленном варианте текста, чтобы снять сомнения рецензента пришлось поместить специальную таблицу.

Противоречия, о которых пишет рецензент в связи с влиянием на заражение дополнительного питания комаров сахаром и их возраста, кажущиеся. Он думает, что читатель не обратит внимания на то, что, оценивая влияние возраста, мы сравниваем всех особей, независимо от состояния яичников, как это делали все предыдущие исследователи (иначе наши данные нельзя было бы сопоставить с опубликованными ранее). А при анализе влияния углеводной подкормки (для правомерности сравнения) развитие яиц учитывалось. Чтобы внести предельную ясность, в исправленный вариант текста пришлось включить 2 таблицы и длинные разъяснения.

Единственно, в чем у нас имеются расхождения с рецензентом (и эти расхождения принципиальные), так это в вопросе о роли углеводного питания как фактора, определяющего возможность заражения переносчиков возбудителем малярии. В своей "Теории связи типов питания и пищеварения кровососущих членистоногих с их способностью быть специфическими переносчиками возбудителей трансмиссивных инфекций" (Паразитология, 1985, т 22, N 1, с. 3-7) проф. А.Н. Алексеев утверждает, что заражаться плазмодием способны только комары, т.к. только они дополнительно (кроме крови) питаются углеводами. Факты, приведенные в настоящей статье, подтверждают то, что было опубликовано ранее (Паразитология, 1987, т. 21, N 2, с. 97-100), а именно, комары способны заражаться и без углеводной подкормки. Все данные о том, как много сахаров в крови позвоночного-донора не имеют к гипотезе проф. А.Н. Алексеева никакого отношения: ведь любой другой кровосос выпил бы ту же кровь (с теми же сахарами), что и комар. Очень жаль, что гипотеза не подтвердилась. В защиту ее автора необходимо сказать, что если бы он ее не выдвинул, нечего было бы проверять. Теперь мы знаем, что ответ надо искать в других причинах. Кстати, проф. А.Н. Алексеев и сам, вероятно, отказался от первоначального предположения. Иначе он бы не захотел стать соавтором (тем более первым) той статьи, в которой впервые показано, что наличие углеводной подкормки не влияет на заражаемость комаров (Паразитология, 1987, т. 21, N 2, с. 97-100). В дальнейших публикациях проф. А.Н. Алексеев (Паразитология, 1990, т. 24, N 5, с. 396-399) рассматривает углеводное питание уже не как ограничивающий, а лишь как модифицирующий фактор.

Надеемся, что наши научные расхождения с рецензентом не будут препятствовать публикации данной работы. Она посвящена совсем другому вопросу. В крайнем случае, абзац о роли сахаров можно и изъять.

1. Рецензент ошибся, обвиняя нас в искаженном цитировании литературы. В работе Rozeboom (1961), о которой идет речь, влияние гонадотропных гормонов все же выявлено, поэтому мы не в праве обойти молчанием своего предшественника. Обратите внимание, что и проф. А.Н. Алексеев понимает указанную работу так же, как и мы. В его статье в сб. "Малярийные паразиты млекопитающих" (1986) написано: "Развитие ооцисты стимулируется не только внутренним механизмом клетки, но и внешними факторами. Rozeboom (1961), например, считал одним из таких факторов гонадотропный гормон самок,... " (стр. 65).

2. Чтобы снять препятствия к публикации работы мы выполнили все требования рецензента - внесли буквально во все места, которые ему показались сомнительными, подробные разъяснения. В результате объем ее резко возрос.

3. Все разъяснения, сделанные по требованию рецензента, снабжены соответствующим указанием. Просим при публикации эти указания оставить. Рецензент придумал их необходимость - ему и слава.

4. Текст статьи, таблицы и список литературы мы перепечатали. (Извините за бумагу - и эту купили с трудом.) Все это высылаем в двух экземплярах вместе с рецензией и первоначальным вариантом рукописи. Резюме и автореферат в перепечатке не нуждаются - возьмите их, пожалуйста, из первого варианта.

С.П.Расницын, А.Б.Званцов, В.В.Ясюкевич "Состояние репродуктивной системы самок комаров влияет на их заражаемость возбудителем малярии."

Прежде всего, благодарим рецензента за доброжелательный анализ рукописи, аргументированные замечания, выявление опечаток и редакционную правку. Надеемся, что нижеследующие разъяснения и дополнения, внесенные в текст рукописи, устранят сомнения рецензента, в том, что статья будет понятна читателю.

(Нумерация ответов соответствует номерам замечаний, проставленных рецензентом на полях рецензии.)

1. Термин "возраст" употребляется нами в общепринятом (в том числе и в биологии) смысле - для обозначения срока, прошедшего от рождения особи до определенного момента. Он измеряется в годах, днях (как в нашем случае), в часах и т.п. Если бы речь шла о "физиологическом возрасте", мы бы употребляли этот термин. "Старыми" мы называем особей в возрасте более 2 суток, а "молодыми" - в возрасте до 2 суток. Все это оговорено в тексте. Однако, поскольку рецензент настаивает, мы внесли специальное разъяснение.

В первоначальном тексте написано (стр. 3), что комары получали кровь только один раз (из чего ясно, что они были на первом гонотрофическом цикле). В связи с замечанием рецензента в новом варианте текста этот момент подчеркнут.

2. Уверенность в правомочности использования модели на основе An.sacharovi обосновывается в нашей более ранней статье. Потому (чтобы не повторяться) мы на нее и ссылаемся. Однако, поскольку рецензент требует, и здесь, и в статье обоснование повторяется:

Уверенность в правомочности модели основывается на том, что этот вид - реальный переносчик малярии человека, тогда как Ae. aegypti, о котором пишет рецензент, таковым не является, поэтому использованная модель ближе к реальному эпидемическому процессу. Кроме того, у Ae. aegypti яйца после кровососания развиваются практически всегда, а у An.sacharovi не всегда, поэтому у первого вида нет возможности оценить влияние развития яиц на заражаемость, а у второго - есть. Успех любого исследования невозможен без использования соответствующей модели. Если бы мы взяли "признанный тандем", никаких данных о об интересующем нас вопросе получить бы не удалось.

Непонятно, что имеет виду рецензент под "признанностью тандема". Если распространенность этой модели, то это не аргумент. (При следовании такому правилу новые модели были бы в принципе невозможны.) Если имеется в виду "естественность" связи переносчика и возбудителя, то следует отметить, что в природе A. aegypti данный вид плазмодия не переносит (Garnham, 1966).

Если считать "неадекватными" все модели, в которых использован не естественный переносчик, придется пренебречь всеми результатами, которые получены на моделях A.aegypti - P.gallinaceum, An.stephensi - P.berghei и другими многочисленными исследователями в нашей стране (проф. А.Н. Алексеев, Ю.В. Чернов, Л.А. Ганушкина и др.) и за рубежом.

3. Расхождение в числе особей, исследованных по разным характеристикам - явление нормальное. Чтобы у читателя не было сомнений в таблице приведены соответствующие данные. Дело в том, что на развитие яиц мы исследовали всех особей каждой группы. Это было необходимо, чтобы набрать для определения зараженности достаточное число особей того состояния, которое встречалось реже. Например, если в исследуемой группе было 60 особей, а особи, развившие яйца составляли 20%, то для того, чтобы определить зараженность 30 особей с развитыми яйцами (к чему мы стремились), приходилось перебирать всю группу, да и то не всегда хватало. Этим (низкой долей особей требуемого состояния) и объясняется то, что в некоторых вариантах опытов заражаемость определена у очень малого числа особей. Чтобы покрыть этот недостаток все опыты имеют много повторностей. Иное дело подсчет ооцист. В тех случаях, когда особей соответствующего состояния было много, на зараженность исследовали не всех, а только тех, которые попали в репрезентативную выборку, объемом 20-30 особей (или чуть больше). Увеличивать выборку сверх этого количества не имеет смысла т.к. в этом случае прирост точности пропорционален корню квадратному из числа исследованных особей. Дальнейший прирост объема даст небольшой прирост точности, а трудозатраты сильно возрастут (ведь подсчет ооцист - дело очень трудоемкое). Например, если вместо 30 исследовать 45 особей, трудозатраты возрастут в полтора раза, а доверительный интервал уменьшится всего на 22%. Конкретно, в табл. 2 в опыте 1М всего было 145 особей. У всех их исследовано состояние яичников. 24 особи (17%) имели развитые яйца (+Я), а 121 (83%) - не развитые (-Я). Из +Я зараженность определена у всех, а из -Я только у 31 особи. В опыте 1С было всего 59 особей, из которых развитые яйца обнаружены у 57 (97%), а у 2 (3%) яйца не развились. Также, как и в предыдущем случае, в том варианте (-Я), где особей было мало, зараженность определена у всех, а в том, где много (+Я), только в выборке, объемом 32 особи. Указанные соображения казались нам очевидными, но в связи с требованием рецензента их пришлось включить в текст.

Теперь о случайных отклонениях от общей закономерности в связи с малым объемом исследованного материала. Сравнение зараженности особей развивших и не развивших яйца, данные о которых приведены в табл. 2, таких отклонений не выявило - говорить о них не приходится. При сопоставлении же зараженности особей не по признаку развития яиц, а по полноте кровососания (табл. 3), на фоне общей закономерности, которая состоит в том, что особи, принявшие неполную порцию крови, заражаются хуже тех, что напились "до отвала", отклонения проявились. Во всех случаях, когда это наблюдалось, число исследованных особей очень мало - значит нельзя исключить ошибку репрезентативности (случайность отклонения), о чем и сказано в тексте.

4. Рецензент сомневается, правильно ли поймет читатель данные о влиянии полноты кровососания на заражаемость. Вот наши аргументы (см. табл. 3). Если взять по итогам, из 623 особей принявших неполную порцию крови, 21% развил яйца, а из них 61% заразился. Из 79% особей, не развивших яйца, заразилось менее 1% (точнее 0.5%). Отсюда следует, что из всех особей с неполной порцией крови доля зараженных составила 13%. Аналогичные расчеты показывают, что среди особей, принявших полную порцию крови, доля зараженных составила 54%. Эта разница существенна (более чем в 4 раза) и статистически достоверна. Тот же результат дает анализ и каждого отдельного опыта.

В первом варианте текста мы не уделили большого внимания описанию указанных подробностей т.к. это казалось очевидным и, главное, статья посвящена другому вопросу: не влиянию полноты кровососания, а влиянию развития яичников. Но раз рецензент считает это важным и недостаточно подробно изложенным, мы вносим соответствующие дополнения в исправленный вариант текста и даже включаем специальную таблицу.

5. Оно, конечно, соблазнительно последовать совету рецензента и вместо подробных таблиц дать только итоги. Это и сократит объем статьи, и сделает невозможными многие замечания типа тех, которые сделал сам рецензент. Однако, при этом исчезнут данные о разбросе результатов, о повторяемости закономерностей и т.п. А все это немаловажно.

Оставляем решение за редакцией - сократить легко при редактировании.

6. Противоречия, о которых пишет рецензент, кажущиеся. Дело в том, что, оценивая влияние возраста, мы сравниваем всех особей, независимо от состояния яичников, как это делали все предыдущие исследователи. А при анализе влияния углеводной подкормки (для правомерности сравнения) развитие яиц учитывалось. Поскольку рецензент считает, что это может запутать читателя, в исправленный вариант текста включены дополнительные разъяснения с соответствующими таблицами.

Что же касается всех данных о содержании сахара в крови позвоночного-донора, то они не имеют к разбираемому вопросу никакого отношения: проф. А.Н .Алексеевым (1985) выдвинута гипотеза о том, что только комары способны заражаться плазмодиями малярии т.к. только они дополнительно (кроме крови) питаются углеводами. Факты, приведенные в настоящей статье, подтверждают то, что было опубликовано ранее (Алексеев, Расницын, 1987), а именно, комары способны заражаться и без углеводной подкормки. В свете этой гипотезы количество сахаров в крови позвоночного-донора не может играть роли: ведь любой другой кровосос выпил бы ту же кровь (с теми же сахарами), что и комар, и разницы в заражении хоть комаров, хоть клещей, хоть цеце, хоть постельного клопа не было бы. Очень жаль, что гипотеза не подтвердилась. (В защиту автора гипотезы необходимо сказать, что если бы он ее не выдвинул, нечего было бы проверять. Теперь, по крайней мере, мы знаем, что ответ надо искать в других причинах.) Кстати, проф. А.Н. Алексеев и сам, вероятно, отказался от первоначального предположения. Иначе он бы не захотел стать соавтором (тем более первым) той статьи, в которой впервые показано, что наличие углеводной подкормки не влияет на заражаемость комаров (Алексеев, Расницын, 1987). В дальнейших публикациях проф. А.Н. Алексеев (Паразитология, 1990, т. 24, N 5, с. 396-399) рассматривает углеводное питание уже не как ограничивающий, а лишь как модифицирующий фактор.

7. Мы считаем само собой разумеющимся, что данные лабораторного эксперимента нужно распространять на "естественный" эпидпроцесс крайне осторожно. Но т.к. рецензент настаивает, в исправленный вариант текста внесена соответствующая оговорка.

Замечание на полях рукописи (стр. 3). Общепринято, если пишется "среднее число", то (при отсутствии специальных оговорок) подразумевается - на единицу. Чтобы не заводить пустого спора, мы выполнили указание рецензента и внесли соответствующее примечание.

За редакционные замечания и выявление опечаток большое спасибо. Но в отношении работы Rozeboom (1961) рецензент ошибается: в ней влияние гормонов все же выявлено. И не только мы так поняли. Вот что пишет, например, проф. А.Н. Алексеев в сб. "Малярийные паразиты млекопитающих" (1986) "Развитие ооцисты стимулируется не только внутренним механизмом клетки, но и внешними факторами. Rozeboom (1961), например, считал одним из таких факторов гонадотропный гормон самок,... " (стр. 65).

Аннотации действительно нет, но есть резюме (на отдельной странице). По указанию рецензента вставляем его в текст.

Очень надеемся, что подробный ответ на рецензию продемонстрирует, что наши расхождения с глубокоуважаемым рецензентом (за исключением чисто научного вопроса о роли дополнительного питания углеводами на заражаемость переносчиков) вызваны исключительно нашим стремлением сжать до минимума текст и, в результате, отсутствием подробных объяснений. В исправленный вариант текста внесены разъяснения, во все без исключения места, которые вызвали замечания рецензента.

Еще раз благодарим рецензента за то, что он выявил те места рукописи, которые можно было неверно понять.

С искренним уважением

С.П.Расницын

Забавно. Как позднее сказал мне сам А.Н. Алексеев, он и был рецензентом этой статьи.

№ опыта	Показатели	комары
№ опыта	Показатели	контрольные	незараженные	зараженные
1*	Число исследованных комаров	7	-	15
	Число яиц (M±m)	131±14	-	106±9
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	28±7	-	33±6

2	Число исследованных комаров	36	14	51
	Число ооцист (M±m)	0	0	37.5±5
	Число яиц (M±m)	100±3	101±6	112±4
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	21±2	24±4	28±3
	Корреляция между числом ооцист и числом яиц (r±m_r)	-	-	-0.14±0.14

№ опыта	Показатели	комары
№ опыта	Показатели	контрольные	незараженные	зараженные
3	Число исследованных комаров	9	-	23
	Число ооцист (M±m)	0	-	37.8±7.3
	Число яиц (M±m)	66±4	-	88 ±3
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	20±5	-	34±5
	Корреляция между числом ооцист и числом яиц (r±m_r)	-	-	0.09±0.21

4	Число исследованных комаров	10	14	8
	Число ооцист (M±m)	0	0	5.9±2.2
	Число яиц (M±m)	86±3	99±6	83±6
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	11±2	21±4	20±5
	Корреляция между числом ооцист и числом яиц (r±m_r)	-	-	0.34±0.31

N	Показатели	комары
N	Показатели	контрольные	незараженные	зараженные

5 II	Число исследованных комаров	28	15	16
	Число яиц (M±m)	109±4	112±6	114±4
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	18±2	21±4	13±2

6 II	Число исследованных комаров	31	9	7
	Число яиц (M±m)	101±4	120±5	111±10
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	20±3	13±3	23±6

7 III	Число исследованных комаров	24	18	15
	Число яиц (M±m)	78±2	80±5	76±8
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	13±2	27±6	39±7

8 III	Число исследованных комаров	32	10	23
	Число яиц (M±m)	95±3	87±4	95±4
	Вариабельность числа яиц (%) (C±m_c)	15±2	15±3	8±3

Показатель	Вид комаров
Показатель	An. sacharovi	An. pulcherimus
Число опытов по заражению комаров возбудителем	14	14
Число опытов, в которых комары заразились	14	14
Число опытов по передаче возбудителя от комаров цыплятам-реципиентам	9	5
Число опытов, в которых цыплята-реципиенты заразились возбудителем от комаров	8	4
Число циклов передачи возбудителя от комаров	7	8

Номер груп- пы	Средний вес самок			Средний вес выпитой крови		Вес крови к весу самки %	Зараженность
Номер груп- пы	n	мг	%	мг	%	Вес крови к весу самки %	n	ОИ	ОО
1К	50	2.8	100	2.6	100	93	20	90	26
1М	80	1.3	46	1.0	38	77	23	78	32
2К	50	2.5	100	2.2	100	88	23	96	95
2М	50	1.5	60	0.9	41	60	27	93	83
3К	50	2.4	100	2.0	100	83	20	100	45
3М	50	1.4	58	1.0	50	71	35	100	53
4К	50	2.5	100	2.2	100	88	27	70	24
4М	100	1.3	52	1.1	50	85	33	82	24
4К	50	2.5	100	2.2	100	88	27	70	24
4М	100	1.3	52	1.1	50	85	33	82	24
5К	50	2.5	100	2.5	100	100	24	92	21
5М	100	1.3	52	1.5	60	115	32	88	20
6К	100	2.2	100	2.3	100	104	28	61	7
6М	100	1.3	59	1.5	65	115	21	67	10

Сравниваемые группы	Число опытов	исследование на ооцисты		исследование на спорозоиты		ВВ %
Сравниваемые группы	Число опытов	n	ОИ	n	СИ	ВВ %
Крупные особи	4	96	88	38	50	57
Мелкие особи	4	127	91	65	50	65

Особи, выпившие полную порцию заразной крови	8	300	82	129	65	79
Особи, выпившие не полную порцию заразной крови и докормленные на здоровом доноре	8	251	55	144	46	84

	Номер группы	Заразная кровь		Не заразная кровь мг	Зараженность комаров
	Номер группы	мг	%	Не заразная кровь мг	n	ОИ	ОО
	14П	2.6	100	0	31	65	12
	14Н	0.3	12	0	32	3	<1
	14Д	0.3	12	23	58	34	3

	15П	2.6	100	0	51	31	7
	15Н	0.4	15	0	30	0	0
	15Д	0.4	15	2.2	46	41	8

	16П	2.5	100	0	48	73	14
	16Н	0.6	24	0	32	0	0
	16Д	0.6	24	2.0	68	72	10

17П		2.3	100	0	39	97	63
17Н		0.2	9	0	33	3	1
17Д		0.2	9	2.1	52	31	1

18П		2.0	100	0	34	35	1
18Н		0.3	15	0	19	0	0
18Д		0.3	15	1.6	32	6	<1

	19П	2.4	100	0	47	89	30
	19Н	0.4	17	0	30	7	<1
	19Д	0.4	17	2.1	45	53	3

	20П	2.9	100	0	52	70	30
	20Н	0.6	21	0	32	0	0
	20Д	0.6	21	2.4	44	51	6

21П		3.2	100	0	59	90	77
21Н		0.4	12	0	25	4	<1
21Д		0.4	12	2.9	35	57	10

22П		3.0	100	0	32	97	72
22Н		0.7	23	0	32	6	1
22Д		0.7	23	2.3	47	64	16

N опыта	Показатели
	на человеке		через мембрану
	Число подсаженых	% напившихся	Число подсаженых	% напившихся
1	100	89	150	43
2	100	48	120	75
3	100	55	100	55
4	100	55	100	74
5	90	80	70	51
6	100	42	100	50
7	50	38	50	64
8	80	50	80	65
9	80	54	100	56
Всего	800	57	870	59

N опыта	Дата опыта	Больной	Пол	Порядковый номер приступа	Мужские гамонты		Женские гамонты
N опыта	Дата опыта	Больной	Пол	Порядковый номер приступа	Пк	Вк	Пк	Вк
1	3/II 1977 г.	К.	ж.	6	1	2	3	5
2	7/II 1977 г.	К.	ж.	8	2	5	8	9
3	28/II 1977 г.	Ш.	ж.	5	32	37	53	59
4	2/III 1977 г.	Ш.	ж.	6	11	11	17	19
5	17/III 1977 г.	Ш.	ж.	6	9	13	12	13
6	7/IY 1977 г.	П.	ж.	4	14	15	18	19
7	9/IY 1977 г.	Б.	ж.	6	8	10	14	15
8	9/IY 1977 г.	П.	ж.	5	11	17	19	21
9	17/IY 1977 г.	E.	ж.	5	35	35	54	50
В среднем					13.7	16.1	22.0	23.3

часы от начала опыта	больная Б.		больная П.
часы от начала опыта	микро гаметоциты	макро гаметоциты	микро гаметоциты	макро гаметоциты
0.5	9	16	-	-
1.0	11	20	14	24
1.5	12	16	15	27
2.0	4	8	14	19
2.5	13	15	10	21
3.0	7	13	11	14
3.5	10	12	14	18
4.0	9	13	10	21
4.5	8	14	9	17

Виды комаров	ОИ	Среднее число ооцист у зараженных комаров	СИ	Доля выживших гаметоцитов (%)		ВВ
Виды комаров	ОИ	Среднее число ооцист у зараженных комаров	СИ	мужских	женских	ВВ
A.messeae	34	6.4	7	0.47	0.31	21
A.atroparvus	24	7.3	15	0.49	0.35	62
A.sacharovi	29	7.2	18	0.48	0.39	59

Вид комаров	L	источник штамма	Чо	Чш	Ж	М	Чж	Чс	ОИ	СИ
An. subalpinus	22	ЦАР	1	1	29	48	0	4	-	25

An. sacharovi	20	Верхняя Вольта	2	2	13-14	26-28	35	22	0	0
	20	Гана	1	1	30	48	14	7	0	0
	22	ЦАР	4	4	29	48	0	20	-	30
	21	ЦАР	2	2	13-27	13-27	17	10	0	0
	22	Либерия	1	1	3	8	5	0	60	-
	20-22	Конго	2	2	26	90	15	18	0	0
	22	Заир	1	1	-	-	0	5	-	0
	20-22	Гвинея Биссау	5	5	5-19	5-48	30	31	0	0
	20	Мали	4	4	8-12	8-25	32	19	0	0
	-	Гвинея	1	1	-	-	13	8	0	0
	-	Экватор. Гвинея	1	1	17	51	9	4	0	0
	-	Индия	1	1	-	-	10	8	0	0
	-	Пакистан	1	1	-	-	11	11	0	0

An. atroparvus	20	Мали	8	7	7-12	8-25	214	246	0	0
	20	Гвинея Биссау	5	5	-	5-48	172	129	0	0
	20	Гвинея	1	1	6-60	-	38	29	0	0
	20	Берег Слоновой Кости	1	1	-	36	33	22	0	0
	20	Верхняя Вольта	2	2	48	26-28	86	60	0	0
	20	Гана	1	1	13-40	40	51	31	0	0
	20	ЦАР	2	2	30	13-27	50	46	0	0
	-	Того	1	1	13-27	12	37	24	0	0
	20	Сомали	2	2	24	-	65	38	0	0
	20	Замбия	1	1	38-71	50-114	33	35	0	0
	-	Экватор. Гвинея	5	5	11	11	107	114	0	0
	20	Конго	2	2	17-62	33-132	75	46	0	0
	-	Индия	2	2	10-26	20-90	45	44	0	0

An. messeae	20	Мали	4	4	8-12	8-25	63	58	0	0
	20	Гвинея Биссау	3	3	6-12	5-18	62	53	0	0
	-	Гвинея	1	1	-	-	27	21	0	0
	20	Верхняя Вольта	2	2	13-14	26-28	39	38	0	0
	20	Гана	1	1	30	46	19	18	0	0
	20	ЦАР	2	2	13-27	13-27	29	19	0	0
	-	Экваттор. Гвинея	1	1	17	51	10	7	0	0
	20	Конго	1	1	26	90	26	7	0	0
	-	Индия	1	1	-	-	22	16	0	0
	-	Пакистан	1	1	-	-	18	16	0	0

Номер партии	1		2
Группа	К	Г	К	Г
Число повторных кровососаний	1	0	1	0
Число исследованных особей	33	33	32	32
Доля зараженных особей (в %)	52	70	100	94
Среднее число ооцист у зараженных особей	8.9	7.0	46.9	64.3
Среднеквадратичное отклонение числа ооцист у зараженных особей	9.5	1.5	33.8	32.4
Коэффициент вариации числа ооцист (в %)	100	21	72	50
Ошибка репрезентативности коэффициета вариации числа ооцист	18	3	9	6

Опыт	Т	Дп	n	ОИ	ОО
1	30	78	32	100	34±5
1	0	0	32	100	29±4

2	40	67	16	88	22±5
2	0	0	28	82	18±4

В среднем	35	72	48	96	30
В среднем	0	0	60	92	24

партия	Т	Дп	Исследования на ооцисты			Исследования на спорозоиты
партия	Т	Дп	n	ОИ	ОО	n	СИ
1	20	56	32	84	20±4	24	92
1	0	0	21	96	20±4	34	97

2	20	13	34	50	3±1	31	39
2	0	0	31	72	3±1	6	17

3	20	12	36	31	2±1	15	40
3	0	0	33	33	2±1	11	55

4	60	56	0	-	-	12	83
	45	35	0	-	-	31	97
	0	0	0	-	-	35	83

в среднем	33	32	102	54	8	113	71
в среднем	0	0	85	63	7	86	80

N опыта	Опыт(без глюкозы)		Контроль (с глюкозой)
N опыта	n	ОИ	n	ОИ
1 3 4 5 6 7 8 9	8 21 35 31 14 21 11 15	88 81 23 19 64 10 73 87	6 25 16 10 10 14 16 8	83 56 31 50 50 14 81 88
По всем опытам	156	45	105	53

№ опыта	Сахар не получали		Сахар получали
№ опыта	n	ОЗ	n	ОЗ
1	7	18	5	8
3	17	42	14	24
4	8	11	5	16
5	6	7	5	7
6	9	14	5	13
7	2	1	2	3
8	8	13	13	21
9	13	9	7	20
все	70	20	56	17

серия	вариант условий	условия
серия	вариант условий	Температура ⁰С	Плотность посадки особей/кв дм	Количество корма мг/лич
I	1	23	50	4.0
I	2	33	50	4.0

II	3	28	10	4.0
II	4	28	250	4.0

III	5	28	50	1.5
III	6	28	50	4.0

Показатель	Различающиеся факторы условий
	Температура		Концентрация особей		Количество корма
	норма	высокая	норма	высокая	норма	малое
Вариант выращивания	1	2	3	4	5	6
Число опытов	6	6	6	6	8	8
Масса куколок самок, мг	4.1±0.1	3.7±0.1	3.8±0.1	3.7±0.1	4.0±0.1	2.0±0.1
Число особей, исследованных на ооцисты	131	130	107	88	201	181
ОИ %	94	93	94	99	96	91
ОО	83±23	59±18	169±26	126±32	68±8	57±9
Число особей исследованных на спорозоиты	90	82	97	115	119	96
СИ %	92	88	90	96	96	94

N опыта	Возраст особей (сутки)	Наличие яиц		Зараженность
		n	доля (%) особей с яйцами	n		ОИ		ОО
		n	доля (%) особей с яйцами	+Я	-Я	+Я	-Я	Я	-Я
1 М С	1.5	145	17	24	31	21	0	11	-
1 М С	5	59	97	32	2	28	0	17	-

2 М С	1	75	53	32	32	53	3	38	17
2 М С	2.5	44	98	32	1	69	0	173	-

3 М С	1	111	74	30	29	83	0	329	-
3 М С	3.5

4 М С	1.5	69	15	10	32	100	4	239	4
4 М С	5.5	94	86	32	13	91	23	106	20

5 М С	1.5	34	18	6	28	100	11	356	20
5 М С	3.5	64	91	32	6	100	0	290	-

6 М С	1.5	98	67	32	32	50	0	29	-
6 М С	3.5	125	94	32	7	62	0	38	-

7 М С	1.5	121	26	32	32	56	0	47	-
7 М С	3.5	68	82	32	12	56	0	47	-

8 М С	1.5	115	86	32	16	47	6	55	31
8 М С	3.5	111	96	34	5	71	0	58	-

все М С	-	768	40	198	232	57	3	139	19
все М С	-	696	92	258	55	70	5	145	20

N опыта	порция крови	Наличие яиц		Зараженность
		n	доля (%) особей с яйцами	n		ОИ		ОО
		n	доля (%) особей с яйцами	+Я	-Я	+Я	-Я	Я	-Я
1	П	45	7	3	32	33	0	8	-
1	Н	75	53	32	32	53	3	38	17

2	П	8	11	9	28	78	0	16	-
2	Н	44	98	32	1	72	0	173	-

3	П	105	30	28	32	50	0	139	-
3	Н	71	96	32	3	63	0	136	-

4	П	99	30	30	31	83	0	144	-
4	Н	133	93	32	9	85	0	265	-

5	П	93	17	16	32	69	0	25	-
5	Н	125	94	32	7	63	0	38	-

6	П	94	11	10	32	40	3	89	15
6	Н	68	82	32	12	56	0	47	-

7	П	63	3	2	30	50	0	12	-
7	Н	58	41	24	32	63	3	99	13

8	П	40	22	9	30	22	0	75	-
8	Н	28	89	25	3	36	0	36	-

ВСЕ	П	623	21	107	247	61	<1	99	15
ВСЕ	Н	602	83	241	99	65	2	151	15

N опыта	Наличие развитых яиц	ОИ индекс		ОО
N опыта	Наличие развитых яиц	+У	-У	+У	-У
1	есть	21	28	11	17
1	нет	0	0	-	-

2	есть	53	69	38	173
2	нет	3	0	17	-

3	есть	83	84	9	256
3	нет	0	0	-	-

4	есть	100	91	239	106
4	нет	4	23	4	20

5	есть	100	100	356	290
5	нет	11	0	20	-

6	есть	50	62	29	38
6	нет	0	0	-	-

7	есть	56	56	47	47
7	нет	0	0	-	-

8	есть	47	71	55	58
8	нет	6	0	31	-

в седнем	есть	57	70	139	145
в седнем	нет	3	5	19	20

Материалы и методы

Материалы и методы

По всем опытам

An. pulcherimus

С искренним уважением

С.П.Расницын